浙江省自然科学基金(Y2100899)
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 相关作者：潘骏戴兵金海东蔡建武范时洋更多>>
- 相关机构：温州医科大学浙江中医药大学温州医学院附属第二医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 低氧对脂肪干细胞和关节软骨细胞三维共培养成软骨能力的影响被引量：4
- 2014年
- 背景:多项体内外研究表明低氧和共培养均促进干细胞向软骨细胞方向分化。目的:观察低氧对脂肪干细胞和关节软骨细胞三维共培养成软骨能力的影响。方法:脂肪干细胞和关节软骨细胞二者按3∶1比例混合,以5×1010 L-1接种于聚乳酸-羟基乙酸共聚物/明胶支架上,分别在常氧(体积分数为20%O2)、低氧(体积分数为5%O2)环境下培养6周。苏木精-伊红染色进行组织学分析,阿尔新蓝染色鉴定糖胺多糖的合成,免疫组化鉴定Ⅱ型胶原的表达,并测定各组支架-细胞复合物的DNA、糖胺聚糖、羟脯氨酸含量。结果与结论:低氧组苏木精-伊红染色显示大量细胞及细胞外基质生成,阿尔新蓝染色显示有大量糖胺多糖生成,免疫组化显示Ⅱ型胶原表达强阳性,且DNA、糖胺聚糖、羟脯氨酸等各项指标均高于常氧组。表明低氧促进脂肪干细胞和关节软骨细胞共培养成软骨分化。
- 戴兵徐海艇金海东陈辉蔡建武范时洋潘骏
- 关键词：干细胞共同培养技术细胞低氧低氧脂肪干细胞聚乳酸-羟基乙酸共聚物
- 免疫逃逸及生物力学方法构建关节组织工程软骨
- 2012年
- 背景:机械应力在软骨组织工程中起着十分重要的作用,但应力对异体种子细胞诱导分化的作用研究较少,应力促进异体干细胞向软骨细胞分化的机制尚不清楚。目的:探讨降低干细胞的免疫原性以最终将异体种子细胞构建的组织工程化软骨应用于临床的可能性。方法:应用计算机检索2000年1月至2012年1月PubMed数据库相关文章,检索词为"engineered articular cartilage tissue,cartilage immune,articular cartilage,biomechanical"。共检索到文献510篇,最终纳入符合标准的文献33篇。结果与结论:利用干细胞多向分化潜能将其诱导分化为成软骨细胞,研究力学载荷对软骨细胞的影响、力学信号的传导机制以便应用生物反应器将软骨细胞进行大规模扩增;利用基因打靶技术可使体外培养的干细胞染色体DNA与外源性同源序列发生重组,达到定点修饰改造细胞β2-微球蛋白基因的目的,降低干细胞主要组织相容性复合体Ⅰ类分子的表达,从而降低其免疫原性,为软骨组织工程提供低免疫原性的种子细胞。
- 李彬温昱易先宏潘骏
- 关键词：生物力学免疫逃逸力学信号Β2-微球蛋白
- β2微球蛋白在骨髓基质干细胞的表达
- 2013年
- 通过流式细胞技术和激光共聚焦显微镜探索骨髓基质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)β2微球蛋白(beta 2 microglobulin,β2M)的表达情况。取第3代相同状态的SD大鼠骨髓基质干细胞,分为A、B两组,A组为未分化的BMSCs,B组为软骨诱导分化1周的BMSCs,两组均采用流式细胞技术和激光共聚焦显微镜分别从数量和细胞轮廓上检测β2M的表达。流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测结果均表明,未分化BMSCs的β2M表达明显低于软骨诱导分化的BMSCs。结果表明,未分化的BMSCs免疫原性较低,处于软骨分化的BMSCs免疫原性明显增强。
- 范时洋金海东戴兵潘骏
- 关键词：骨髓基质干细胞Β2微球蛋白免疫原性
- 大鼠多能成体祖细胞体外成软骨的诱导和鉴定
- 2016年
- [目的]探讨大鼠多能成体祖细胞(multipotent adult progenitor cells,MAPCs)在特定培养条件下向软骨细胞定向分化的能力。[方法]分离培养大鼠MAPCs,扩增至第2代,观察其形态学特点,并将其离心成团后分为2组,诱导组应用转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)、骨形态发生蛋白-6(bone morphogenetic protein-6,BMP-6)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factors-1,IGF-1)及地塞米松等进行成软骨诱导分化,对照组用含10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的高糖DMEM培养液(dulbecco's modifiedeagle medium high-glucose,H-DMEM)常规培养液自然分化。以Safranin O和Ⅱ型胶原免疫组化染色等进行鉴定,阿尔新蓝比色法测定糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)的含量。[结果]体外定向诱导后MAPCs表现出软骨细胞的特性。诱导组形成了透明软骨样外观的细胞团,而对照组体积小、松散,Ⅱ型胶原免疫组化染色显示诱导组可见成熟软骨陷窝形成,Safranin O染色显示诱导组软骨特异性细胞外基质沉积,诱导组GAG的含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]MAPCs具有良好的成软骨潜能,可以成为软骨组织工程良好的种子细胞来源。
- 徐海艇潘骏李永领朱烈烈
- 关键词：软骨细胞诱导分化软骨组织工程
- siRNA对预分化骨髓间充质干细胞β_2M表达的影响
- 2014年
- 目的:研究小干扰RNA(siRNA)对预分化骨髓间充质干细胞(BMSCs)β2-微球蛋白(β2M)基因表达的影响。方法:BMSCs成软骨诱导液预分化21 d后,将β2M siRNA用Lipofectamine 2000转染BMSCs、分为转染组、空白对照组和阴性对照组,应用实时定量PCR、Western blotting、激光共聚焦显微观察等方法检测siRNA对预分化BMSCs的β2M mRNA和蛋白的表达情况,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光检测预分化BMSC的蛋白聚糖多聚体和Ⅱ型胶原分泌情况。结果:实时定量PCR、Western blotting和激光共聚焦显微观察结果显示siRNA成功抑制β2M mRNA和蛋白的表达,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光结果显示siRNA不影响预分化BMSCs蛋白聚糖多聚体和Ⅱ型胶原蛋白的分泌。结论:RNAi干扰β2M可降低BMSCs中β2M mRNA和蛋白的表达,但不影响预分化BMSCs的软骨细胞特性。
- 戴兵范时洋陈龙金海东蔡建武潘骏
- 关键词：Β2-微球蛋白骨髓间充质干细胞
- 橄榄苦苷对IL-1β诱导的大鼠软骨细胞损伤的作用及机制研究被引量：7
- 2015年
- 目的:研究橄榄苦苷对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的SD大鼠关节软骨细胞的影响。方法:采用酶两步顺序消化法消化SD大鼠关节软骨分离细胞,体外培养软骨细胞,光学显微镜观察细胞形态,阿尔新蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化法对软骨细胞进行鉴定。橄榄苦苷对软骨细胞的细胞毒性采用CCK-8实验进行评估。取第3代软骨细胞,分别用浓度为10、50或100μmol/L的橄榄苦苷预先处理,随后用IL-1β刺激细胞24 h,所生成的NO和前列腺素E2(PGE2)的量分别用格里斯重氮化反应和酶联反应吸附实验进行评估。基质金属蛋白酶(MMP)-1和MMP-13 mRNA的表达利用实时荧光定量PCR进行定量检测。采用免疫印迹实验分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶2(COX-2)和活化NF-κB的蛋白表达。结果:软骨细胞在不同浓度橄榄苦苷培养24 h后,其生存能力与对照组相比无明显差异。橄榄苦苷可以显著降低IL-1β刺激下软骨细胞MMP-1和MMP-13 mRNA的表达及NO、PGE2的生成。橄榄苦苷通过减少IκB蛋白的降解从而抑制IL-1β介导的NF-κB通路的活化。结论:橄榄苦苷可通过NF-κB信号转导通路调控炎症的发生发展,进一步明确了橄榄苦苷对关节炎防治作用的分子机制,为骨关节炎的免疫治疗提供了重要的基础理论依据。
- 戴兵徐俐金海东蔡宁宇陈辉李斌蔡建武潘骏
- 关键词：橄榄苦苷白细胞介素1Β一氧化氮骨关节炎
