国家自然科学基金(20472084)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
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- 大肠杆菌K12苹果酸酶的克隆、表达与纯化被引量：3
- 2006年
- 以大肠杆菌K12基因组DNA为模板,PCR扩增得到NAD+依赖型苹果酸酶(NAD-ME)的全长基因,并克隆到载体pET24b(+)中,得到表达质粒pET24b-ME。在IPTG诱导下,携带pET24b-ME的大肠杆菌BL21(DE3)高效表达分子量约为65 kDa的可溶性蛋白。重组NAD-ME经镍亲和层析纯化,比活达到100 U/mg以上。以上结果为深入研究苹果酸酶生物催化特性及其与辅酶的相互作用奠定了基础。
- 王金霞谭海东赵宗保
- 关键词：苹果酸酶蛋白质纯化辅酶
- 利用人工氧还酶体系催化L-苹果酸氧化脱羧反应被引量：7
- 2012年
- 利用含人工氧还酶体系的粗酶液代替纯酶催化反应,以省去酶分离纯化过程.由苹果酸酶突变体ME-t(MEL310R/Q401C)和非天然辅酶烟酰胺5-氟胞嘧啶二核苷酸(NFCD+)组成的人工氧还酶体系可以催化氧化L-苹果酸生成丙酮酸,并得到非天然辅酶的还原态(NFCDH).利用含人工氧还酶体系的粗酶液催化反应,只得到单一产物丙酮酸,其选择性与纯酶催化的相同.来自粪肠球菌Enterococcus faecalis的NADH氧化酶(NOX)可再生NFCD+.与含NAD+,ME粗酶液和NOX粗酶液的偶联反应体系相比,含NFCD+,ME-t粗酶液和NOX粗酶液的体系获得的丙酮酸产率高9%,而副产物乳酸明显减少.可见人工氧还酶体系使用更方便,且产物选择性更高,有望代替纯酶催化反应.这为降低生物催化剂的成本,扩大生物催化反应的应用提供了一种新的策略.
- 纪德彬王磊王磊周雍进杨薇王倩
- 关键词：生物催化粗酶液苹果酸酶丙酮酸
- 新型吡啶核苷酸辅酶依赖型生物催化体系的研究进展
- ＜正＞吡啶核苷酸辅酶,包括烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 （NADP）以及它们相应的还原型态（NADH）和（NADPH）,它们在生命活动中具有非常重要的作用,参与能量传递、物质代谢和信号传导等过...
- 王金霞刘武军侯淑华吴思国谭海东赵宗保
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