国家自然科学基金(31060129)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- DEN2感染对小鼠髓源性树突状细胞膜表面分子TLR4、TLR7表达的影响
- 2017年
- 目的探讨登革病毒2型（DEN2）感染对小鼠髓源性树突状细胞表面分子TLR4、TLR7表达影响。方法BALB／C乳鼠脑内接种及C6／36细胞增殖病毒，RT．PCR鉴定病毒核酸；rmGM．CSF和rmIL-4联合诱导鼠源性DC；直接免疫荧光法观察DEN2感染DC；流式细胞术检测DC被DEN2感染后膜表面分子CD11C、CD86、I-A／I．E类分子表达的动态变化；RT—PCR动态检测DEN2感染DC后DEN2RNA、TLR4和TLR7mRNA水平表达的变化。结果IL_4和GM．CSF诱导小鼠骨髓来源DC的纯度可达到70％；DEN2能够感染小鼠骨髓来源DC；与阴性对照组相比，接种病毒组[1×104半数组织培养感染剂量（TCID50）]的DC膜表面分子CD86、I-A／I．E的百分率差异无统计学意义。与阴性对照组相比，接种病毒组（1×105 TCID50）的DCs膜表面分子CD86、I-A／I—E的百分率差异均有统计学意义．但各组百分率的变化并未随着时间的延长呈现出明显的上升或下降的趋势；随着病毒剂量的增加，DC膜表面分子CD86、I-A／I—E的百分率呈现出上升的趋势；与阴性对照组比较，RT．PCR证明各组病毒mRNA水平随着病毒剂量的增大而逐渐升高。与阴性对照组比较，RT—PCR检测各组被DEN2感染的DCTLR4、TLR7mRNA随着病毒剂量的增加，呈现下调的趋势。结论DEN2可促进DC的成熟；DEN2感染DC后，TLR4、TLR7mRNA水平随病毒mRNA水平的增加而降低，提示TLR4、TLR7与病毒感染密切相关，在DEN致病中发挥了一定的作用和功能。
- 张海燕左丽尹科曾雯
- 关键词：树突状细胞
- 登革2型病毒粘附人血小板的体外研究初探被引量：1
- 2011年
- 目的:了解登革2型病毒(DEN-2)是否能在体外粘附人血小板并制备抗人血小板抗体。方法:密度梯度离心法分离血小板,DEN-2与血小板体外共孵育2 h,间接免疫荧光法分析DEN-2粘附人血小板情况。采用TritonX-100裂解法制备血小板蛋白并经皮下注射免疫BALB/C小鼠获取抗血小板血清,经Western blot、间接免疫荧光及间接ELISA对抗血清进行鉴定及效价测定。结果:间接免疫荧光法提示DEN-2可体外粘附人血小板;Western blot、间接免疫荧光法表明获得特异性抗人血小板抗体,间接ELISA测定抗体效价可达到1∶12 800。结论:DEN-2能够在体外粘附人血小板,血小板蛋白免疫BALB/C小鼠后可产生较高效价的抗人血小板抗体,为今后研究血小板在DEN-2感染中的免疫学功能奠定一定的基础。
- 张敏商正玲左丽
- 关键词：登革热病毒血小板荧光免疫测定
- DEN2对鼠源性DCTLR7、MyD88、NF-κB的表达与细胞因子分泌的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:观察登革2型病毒(DEN2)感染鼠源性DC后TLR7、MyD88、NF-κB的表达及IFN-α、IP-10的分泌变化,探讨MyD88依赖型信号通路在DEN2感染中的作用。方法:rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导C57BL/6小鼠骨髓源性树突状细胞(BMDC),常规方法增殖鉴定DEN2,利用DEN2(MOI=0.4)感染BMDC,直接免疫荧光检测DEN2吸附鼠源性BMDC;West-ern blot检测感染后不同时间TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达。双抗体夹心ELISA法检测感染后不同时间细胞培养上清IP-10、IFN-α的水平,RT-PCR检测相应时间点被感染DC内DEN2 NS5核酸水平。结果:rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导C57BL/6小鼠BMDC,5天后获得纯度为70%的相对未成熟DC;与对照组相比DEN2感染BMDC后24小时TLR7、MyD88、NF-κB的表达升高;48小时TLR7表达低于正常对照组,但MyD88、NF-κB的表达高于正常对照组;72小时DEN2感染组TLR7、MyD88、NF-κB的表达均较前降低,且TLR7、MyD88的表达低于正常对照组。DEN2感染组细胞培养上清IFN-α、IP-10的水平明显高于正常对照组,IFN-α逐渐升高,72小时分泌量达最高,可分泌(933.94±29.02)ρg/ml;IP-10在48小时分泌达高峰,分泌量为(834.44±43.60)ρg/ml,结果具有统计学意义(P<0.05),且被感染DC内DEN2 NS5病毒核酸水平48小时达最高,72小时有所降低。结论:DEN2可影响小鼠BMDC TLR7、MyD88、NF-κB的表达,促进其分泌IFN-α、IP-10进而影响病毒复制。
- 曾雯左丽尹科张海燕
- 关键词：树突状细胞MYD88细胞因子
- 登革2型病毒体外诱导Ana-1巨噬细胞极化及其TLR7表达的研究被引量：1
- 2013年
- 目的:研究登革2型病毒体外诱导Ana-1细胞极化及TLR7表达情况,分析其在登革病毒致病过程中的可能作用。方法:用DEN2感染Ana-1细胞,24、72、120小时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测病毒核酸、iNOS、Arg-1、IL-10、IL-12p40 mRNA;Western blot检测iNOS、Arg-1、TLR7蛋白;双抗体夹心ELISA法检测TNF-α水平。结果:巨噬细胞被DEN2感染后病毒核酸在72小时达峰值,2-ΔΔCt值为159.98±37.80;iNOS mRNA及蛋白表达明显上升(P<0.05),IL-12p40 mRNA、TNF-α水平显著升高(P<0.05),72小时达峰值;IL-12p40 mRNA 2-ΔΔCt值为11.1±2.41,TNF-α浓度为(454.72±13.41)pg/ml。Arg-1 mRNA及蛋白较M2型极化对照组降低(P<0.05);IL-10 mRNA与正常对照组无显著差异(P<0.05);TLR7表达低于同期正常对照组。结论:Ana-1细胞被DEN2感染后向M1型极化;DEN2可下调Ana-1细胞TLR7表达,可能是DEN2发生免疫逃逸的机制之一;Ana-1细胞TNF-α水平与细胞内DEN2核酸呈正相关。
- 龙世棋商正玲左丽
- 关键词：登革2型病毒巨噬细胞极化
- DEN2感染对MyD88沉默的小鼠树突状细胞相关膜分子表达及炎症因子分泌的影响
- 2013年
- 目的:探讨髓样分化因子88(MyD88)在DEN2感染BMDC后对其成熟及相关炎症因子分泌的影响。方法:利用rmIL-4、rmGM-CSF联合诱导培养BMDC;针对BMDC MyD88基因,设计并合成3对MyD88 siRNA,脂质体法转染BMDC;通过Western blot筛选一对高沉默效率的MyD88 siRNA;常规方法增殖及鉴定DEN2;直接免疫荧光及RT-PCR鉴定DEN2吸附BMDC;流式细胞术分析对照组、感染组、RNAi组、感染RNAi组、无义RNAi组BMDC膜表面分子CD86、MHCⅡ的表达,双抗体夹心ELISA法检测上清液中IP-10、TNF-α及IFN-α的分泌水平。结果:经细胞因子诱导培养后可获得CD11c表达为70.85%±2.66%的相对未成熟的BMDC;与空白对照组相比,序列1～3组的MyD88蛋白质表达率分别降低28.36%±14.26%、54.20%±22.93%、73.14%±11.80%,其中序列3的沉默效率最高,具有显著统计学意义(P<0.01);DEN2可吸附BMDC。与对照组比较,DEN2感染组DC膜表面分子CD86表达降低,MHCⅡ增高,感染RNAi组的MHCⅡ、CD86表达无明显变化;与对照组比较,DEN2感染组分泌TNF-α、IFN-α及IP-10的水平均增高,而感染RNAi组分泌的IP-10、IFN-α、TNF-α则无明显变化。结论:DEN2可吸附BMDC,并促使其成熟及细胞因子分泌;siRNA可沉默MyD88,有效阻断DEN2感染BMDC的胞内信号传导及其所引起的成熟及炎症因子分泌。
- 尹科左丽
- 关键词：MYD88RNA干扰
