吉林省科技发展计划基金(20050211-2)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 相关作者：李建华任科研王秋悦宫鹏涛张西臣更多>>
- 相关机构：吉林省兽医科学研究所吉林大学更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 柔嫩艾美耳球虫Rhomboid相关基因在卡介苗中的表达
- 目的:构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒Rho-261和Rho-361,并将柔嫩艾美耳球虫Rhomboid蛋白基因在分枝杆菌中进行克隆和表达。方法:利用柔嫩艾美耳球虫单克隆抗体从本室所构建的cDNA表达丈库中筛选出1个Rho...
- 王秋悦李建华张西臣宫鹏涛
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫穿梭载体
- 文献传递
- 柔嫩艾美耳球虫rhomboid抗原基因在卡介苗中的克隆与表达被引量：5
- 2009年
- 以含柔嫩艾美耳球虫rhomboid基因的重组质粒为模板,应用PCR方法扩增该基因完整开放阅读框,克隆至pMD18-T载体中。分别用限制性内切酶PstⅠ/ClaⅠ和PvuⅡ/ClaⅠ进行双酶切,将rhomboid目的基因克隆到大肠杆菌-分支杆菌穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中,获得重组质粒pRho-261和pRho-361。将重组质粒电穿孔转化卡介苗,经热诱导后对其表达产物进行SDS-PAGE和western blot分析。结果表明成功构建了两个重组质粒,其表达产物与柔嫩艾美耳球虫阳性血清具有免疫反应性,为重组卡介苗在鸡球虫病防治方面的研究奠定了基础。
- 王秋悦任科研宫鹏涛李建华张西臣
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫球虫病疫苗
- EGFP标记柔嫩艾美耳球虫重组卡介苗的构建及其在鸡体内的分布被引量：2
- 2008年
- 鸡球虫病给禽类养殖业带来重大经济影响.本实验利用DNA重组技术将柔嫩艾美尔球虫保护性抗原基因rhomboid和增强型绿色荧光蛋白EGFP基因串连,将其克隆到BCG中,构建EGFP标记柔嫩艾美耳球虫重组卡介苗pMV361-Rho/EGFP.将rBCG口服免疫6日龄雏鸡,一周后剖杀,取肝、脾、肺、肾、盲肠各组织器官制作冰冻切片,激光共聚焦显微镜观察各组织器官rhomboid表达情况.另分别于免疫后7,14,21,28天提取肝、脾、肺、肾、盲肠各组织器官总RNA,实时定量RT-PCR方法检测rhomboid目的基因转录情况,比较各时期组织器官rhomboid基因表达量.结果显示,免疫一周后,用激光共聚焦显微镜观察到在肝、脾、肺、肾、盲肠各组织器官中均有EGFP表达.实时定量RT-PCR结果显示,免疫14天后rhomboid基因表达量达到高峰,随后开始下降,至28天后消失.本研究为重组卡介苗疫苗作为抗球虫疫苗的研究奠定基础.
- 王秋悦任科研李建华张西臣宫鹏涛
- 关键词：球虫病EGFP激光共聚焦显微镜实时定量RT-PCR
