黑龙江省卫生厅科研项目(2010-482)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 相关作者：朱贵明张鹏霞汪坤福李丽孟庆媛更多>>
- 相关机构：佳木斯大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省卫生厅科研项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- RPL30基因哺乳动物表达载体的构建及其初步表达分析被引量：1
- 2012年
- 目的克隆RPL30基因并构建其哺乳动物表达载体,然后将该基因导入人肝癌细胞系HepG2进行初步表达分析,并考察RPL30的超表达对硒蛋白P基因转录水平的影响。方法应用RT-PCR方法扩增出目的基因的全长编码区,并利用双酶切连接法将其连入哺乳动物表达载体pcDNA3.1(+)。采用脂质体转染法转染HepG2细胞后应用RT-PCR法检测RPL30基因的表达以及其超表达对硒蛋白P基因转录水平的影响。同时在转染细胞中添加无机硒后研究其对RPL30和硒蛋白P基因转录水平的调控。结果成功地构建了RPL30表达质粒pcDNA3.1-RPL30,转染HepG2细胞后实现基因的超表达,相对于GFP对照转染细胞增加了4～5倍。然而,RPL30基因的超表达并没有显著提高硒蛋白P的转录水平。硒对RPL30基因的表达基本上没有影响,但却显著提高硒蛋白P的表达水平。结论 RPL30哺乳动物表达载体的成功构建以及RPL30超表达后的初步分析为下一步深入研究硒蛋白的生物合成机制打下了基础。
- 李丽朱贵明汪坤福张鹏霞
- 关键词：克隆硒蛋白P
- SBP2基因哺乳动物表达载体的构建及其初步表达分析
- 2015年
- 目的克隆硒半胱氨酸插入序列(SECIS)结合蛋白(SBP)2基因,并构建其哺乳动物表达载体,导入293T细胞进行初步表达,分析其对硒蛋白P基因转录水平的影响。方法应用酶切的方法从保存的质粒p CMV-XL4-SBP2中将目的基因切割下来,并利用双酶切连接法将其连入哺乳动物表达载体pc DNA3.1(+)。采用脂质体转染法转染293T细胞后应用RT-PCR法检测SBP2基因的表达以及其超表达对硒蛋白P基因转录水平的影响。同时在转染细胞中添加无机硒后研究其对SBP2和硒蛋白P基因转录水平的调控。结果成功构建了SBP2表达质粒pc DNA3.1-SBP2,转染293T细胞后实现基因的超表达,同时添加硒对SBP2基因的表达有明显影响。SBP2基因的超表达显著提高硒蛋白P的转录水平,添加硒进一步增加了硒蛋白P的转录。结论 SBP2哺乳动物表达载体的成功构建以及SBP2超表达后的作用分析为下一步深入研究硒蛋白的生物合成机制奠定了基础。
- 盛延良江旭东罗文哲卢凤美孟庆媛朱贵明
- 关键词：克隆硒蛋白P
- 半合成-酶连法克隆EFsec基因及其初步表达分析
- 2012年
- 目的将缺失一段编码序列的真核硒代半胱氨酸-tRNA特异性延伸因子(EFsec-)基因补齐,并克隆到真核表达载体进行初步表达分析。方法采用人工合成法合成所缺失的基因片段,然后利用EFsec-基因序列中靠近5'端存在的天然酶切位点进行酶连,再用PCR方法扩增出拼接产物,并将其克隆到pcDNA3.1(-)载体。采用脂质体转染法转染HEK293T细胞后应用RT-PCR法检测EFsec基因的表达。结果准确快捷地将EFsec-基因补齐了其5'端缺失的基因序列,并成功地构建了其表达质粒pcDNA3.1-EFsec,转染哺乳动物细胞后检测到了EFsec基因的显著表达。结论半合成-酶连法可以高效快捷地补齐并克隆缺失的EFsec-基因,提供了一种拼接基因的有效策略和方法,同时也为EFsec基因的下一步研究奠定了基础。
- 李丽朱贵明汪坤福张鹏霞
- 关键词：克隆硒蛋白
