浙江省科技攻关计划(2005C13025)
- 作品数：8 被引量：41H指数：3
- 相关作者：应国清易喻王鸿高飞陈建澍更多>>
- 相关机构：浙江工业大学杭州九源基因工程有限公司艾博生物医药(杭州)有限公司更多>>
- 发文基金：浙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 超氧化物歧化酶吸附分离-化学修饰的耦合过程被引量：1
- 2009年
- 以超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)为模板蛋白,将其分离纯化过程和修饰过程耦合起来,从而获得比活更高、稳定性更好的修饰SOD。将SOD选择性地吸附在DEAE-52层析柱和铜离子螯合葡聚糖凝胶柱上,先不经洗脱分离,直接用活化的聚乙二醇(PEG)5000对吸附在柱上的SOD进行化学修饰,再通过特异性洗脱分离获得PEG-SOD,使SOD分离纯化和修饰过程同步完成。SOD通过离子交换吸附层析-PEG修饰耦合过程和金属螯合层析-PEG修饰耦合过程,所得的PEG-SOD比活力分别为9638.0U/mg和9067.8U/mg,纯化倍数分别为1.87倍和1.755倍,氨基修饰率分别为35.3%和40.9%。结果表明SOD的分离纯化-化学修饰耦合过程是可行的,且金属螯合层析-修饰耦合过程的效果要优于离子交换吸附层析-修饰耦合过程。
- 李东华王鸿孙汉栋易喻应国清
- 关键词：超氧化物歧化酶化学修饰离子交换层析耦合过程
- 超氧化物歧化酶固相修饰的研究
- 2010年
- 对超氧化物歧化酶固相修饰进行初步研究。选择Q-Sepharose FF作为固相吸附介质,考察了吸附的影响因素。采用三聚氯氰活化好的单甲氧基聚乙二醇5 000分别对游离SOD和吸附在Q-Sepharose FF上的固相SOD进行化学修饰,考察了修饰的影响因素,并对两者进行了比较。Q-Sepharose FF吸附SOD的最佳条件:时间30 min,pH值9.0,SOD浓度3.0 mg/mL,最佳吸附条件下吸附量约为22.5 mg/mL;最佳固相修饰条件:时间270 min,修饰缓冲液浓度40 mmol/L,mPEG-5 000与SOD的摩尔比为50∶1,最佳固相修饰条件下固相SOD修饰率为38.3%,修饰后酶活为5 555 U/mg,酶活回收率为72.3%;经SDS-PAGE分析表明固相修饰可以减少修饰的随机性。
- 易喻周辉平陈建澍梅建凤王鸿孙汉栋应国清
- 关键词：超氧化物歧化酶
- 单甲氧基聚乙二醇固相修饰超氧化物岐化酶的研究
- ＜正＞超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,简称SOD）是体内氧自由基的天然清除剂,临床上用于治疗氧自由基过多引起的多种疾病,但由于超氧化物歧化酶固有的结构不稳定和化学不稳定,容易受到物理和化学影响,...
- 易喻周辉平王鸿孙汉栋应国清
- 关键词：超氧化物歧化酶
- 文献传递
- 抗菌肽的研究进展被引量：28
- 2008年
- 近年来,由于细菌耐药性问题日趋严峻,开发新型抗菌制剂已迫在眉睫。抗菌肽具有相对分子质量小、对热稳定、抗菌谱广及不同于抗生素的抗菌机制,不产生耐药性,因而具有重要的临床应用价值。本文对天然来源、蛋白质酶解、化学合成及基因工程方法产生的抗菌肽及其研究进展进行了综述。
- 祝骥高飞易喻陈建澍应国清
- 关键词：基因工程化学合成
- 超氧化物歧化酶分离-修饰耦合过程的研究
- 2009年
- 以超氧化物歧化酶(SOD)为模板蛋白,研究其分离—修饰耦合工艺.即将SOD选择性地吸附在铜离子螯合葡聚糖凝胶层析柱上,先不经洗脱分离,直接用活化的聚乙二醇(PEG)5000对吸附的SOD进行化学修饰,再通过特异性洗脱分离获得PEG-SOD,使得SOD分离纯化和修饰过程同步完成.获得了一条SOD金属螯合层析分离—PEG化学修饰耦合工艺路线.获得的PEG-SOD比活9 055.1 U/mg,纯化倍数1.75倍,氨基修饰率42.3%,修饰前后活性保留87.1%.证明SOD的分离-修饰耦合工艺是可行的.
- 陈佳乐高飞易喻应国清
- 关键词：超氧化物歧化酶化学修饰耦合过程
- 聚乙二醇定点修饰重组人粒细胞集落刺激因子突变体的研究被引量：3
- 2007年
- 研究了重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG-CSF)的聚乙二醇化修饰、分离纯化和活性鉴定。通过对人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)第1,3,4,5,17位氨基酸进行突变,并在C末端加了一个半胱氨酸,获得了体外活性为原型rhG-CSF150%以上的重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG-CSF)。然后用分子量为20kD的甲氧聚乙二醇马来酸酐(mPEG-Mal)修饰rmhG-CSF,反应混合物经离子交换和凝胶过滤柱纯化,得到纯化的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子突变体(PEG-rmhG-CSF)。SDS-PAGE电泳分析表明纯化后的PEG-rmhG-CSF的纯度大于95%,体外活性分析表明PEG-rmhG-CSF活性优于目前临床使用的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF,NeulastaR○),药代动力学研究表明PEG-rmhG-CSF体内半衰期约为14h,比修饰前延长了7倍。
- 黄岩山金荣刘晓妮王昌梅戎亚雯陈智
- 关键词：纯化
- 聚乙二醇修饰鼠抗人CD3单克隆抗体的研究被引量：1
- 2008年
- 确定一条聚乙二醇化鼠抗人CD3单克隆抗体和抗体片段的制备工艺路线.以胃蛋白酶酶解并通过凝胶柱分离和纯化得到抗体Fab′,利用PEG-SPA修饰抗体和抗体片段Fab′上的氨基,通过体内和体外T细胞增殖实验,考查修饰后的抗体和抗体片段的免疫活性.较佳的修饰工艺条件为:在pH9.0硼酸缓冲液,反应温度25℃,抗体浓度0.2 mg/mL,抗体和聚乙二醇摩尔比为1∶20,反应3 h.修饰后抗CD3单抗全抗,对T淋巴细胞增殖抑制活性下降了32.28%,抗体Fab′下降了7.96%,PEG化Fab′下降了19.92%.利用聚乙二醇修饰抗体和抗体片段,提高了抗体半衰期,且无细胞毒性,活性损失较小,该技术具有较高的可行性,可极大的提高单克隆抗体尤其是非人源性抗体在临床上的应用.
- 马杭圣王鸿孙汉栋易喻应国清
- 关键词：抗CD3单克隆抗体聚乙二醇化学修饰免疫活性
- 聚乙二醇修饰鼠抗人CD3单克隆抗体被引量：2
- 2008年
- 目的:确定一条聚乙二醇化鼠抗人CD3单克隆抗体(mAb)和抗体片段的制备工艺路线。方法:以胃蛋白酶酶解并通过凝胶柱分离和纯化得到抗体Fab′,利用PEG-SPA修饰抗体和抗体片段Fab′上的氨基,通过体内和体外T细胞增殖实验,考查修饰后的抗体和抗体片段的免疫活性。结果:较佳的修饰工艺条件为:在pH9.0硼酸缓冲液,反应温度25℃,抗体浓度0.2g/L,抗体和聚乙二醇摩尔比为1∶20,反应3h。修饰后抗CD3mAb全抗,对T淋巴细胞增殖抑制活性下降了32.3%,抗体Fab′下降了8.0%,PEG化Fab′下降了19.9%。利用ELISA检测血液中修饰后的抗体和抗体片段的半衰期。结果显示mPEG修饰后抗体和抗体片段血药浓度降低明显减缓,修饰后抗CD3抗体半衰期从2.66h延长到8.72h,延长了3.28倍。而修饰后抗体Fab′片段半衰期从2.21h延长到4.17h,延长了1.90倍。结论:利用聚乙二醇修饰抗体和抗体片段,提高了抗体半衰期,且无细胞毒性,活性损失较小,该技术具有较高的可行性,可极大地提高mAb尤其是非人源性抗体在临床上的应用。
- 马杭圣王鸿孙汉栋易喻应国清
- 关键词：单克隆抗体CD3聚乙二醇化学修饰免疫活性
- 超氧化物歧化酶化学修饰的研究进展及展望被引量：6
- 2008年
- 超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD),是一种新型的、具有重要临床应用价值的药用酶,通过化学修饰可以改进诸如抗炎活性和药代动力学等性质以获得更好的疗效。本文综述了经典修饰剂PEG和新近开发修饰剂如粘多糖和小分子脂肪酸等对SOD的修饰方法,比较了修饰前后SOD性质的变化,总结了修饰后SOD产品的应用现状,并对今后SOD化学修饰的研究作出展望。
- 陈佳乐高飞易喻王鸿应国清
- 关键词：超氧化物歧化酶化学修饰
