上海市青年科技启明星计划(09QA1407500)
- 作品数：6 被引量：23H指数：3
- 相关作者：王巍巍张金元王葳姜燕程劲更多>>
- 相关机构：解放军第四五五医院上海中医药大学中国人民解放军更多>>
- 发文基金：上海市青年科技启明星计划国家自然科学基金南京军区医学科技创新课题更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 低氧诱导因子1α基因转染的人脂肪源性干细胞对肾小管上皮细胞损伤的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:将低氧诱导因子1α(HIF-1α)基因质粒高效感染人脂肪源性干细胞(hADSCs),并与顺铂诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)共孵育,观察hADSCs对HK-2细胞损伤的影响。方法:以慢病毒为载体,将HIF-1α转染hADSCs,与顺铂诱导的HK-2细胞共孵育。电镜观察HK-2细胞形态、结构的变化;原位末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡指数;Westernblot检测HK-2细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病2基因(Bcl-2)的变化及hADSCs细胞促红细胞生成素(EPO)、血红素氧化酶1(HO-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,ELISA检测培养液中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子1(KIM-1)的浓度,EPO、HO-1、VEGF和HIF-1α的浓度变化。结果:(1)与顺铂诱导组相比,共孵育后的HK-2细胞结构损伤减轻、凋亡细胞减少,caspase-3的表达低于顺铂诱导组、Bcl-2的表达水平升高;其中HIF-1α转染的hADSCs与HK-2细胞共孵育后,HK-2细胞损伤明显减轻,凋亡蛋白的变化更为明显。(2)顺铂诱导组培养液中NGAL、KIM-1浓度升高,以KIM-1变化明显(P<0.05);细胞共孵育后培养液中KIM-1浓度降低,转染组较明显。(3)转染后的hADSCs细胞内EPO、HO-1、VEGF的蛋白表达升高;培养液中HO-1、VEGF含量增高(P<0.05),HIF-1α、EPO的含量变化不明显。结论:hADSCs与HK-2细胞共孵育后,可以减轻顺铂诱导的HK-2细胞结构损伤、抑制细胞凋亡,HIF-1α转染hADSCs后其作用更为明显,可能与细胞保护因子的高表达有关。
- 王巍巍李慧凛张金元王葳
- 关键词：低氧诱导因子1Α基因转染肾小管上皮细胞
- 低氧诱导因子1α基因修饰脂肪干细胞修复小鼠急性肾损伤被引量：5
- 2012年
- 背景:干细胞移植为肾损伤的治疗提供了一个新的途径,治疗基因转染干细胞可增强对疾病的治疗效果。目的:探讨低氧诱导因子1α基因修饰的脂肪源性干细胞移植对急性肾损伤小鼠肾脏结构和功能的影响。方法:连续2d向BALB/C裸鼠腹腔注射10mg/kg顺铂诱导急性肾损伤小鼠模型。造模24h后经小鼠尾静脉注射含1×105个脂肪源性干细胞或转染低氧诱导因子1α的脂肪源性干细胞的细胞悬液,3d后留取小鼠血液及肾组织标本进行实验。以注射200μL生理盐水的急性肾损伤小鼠作为模型对照,以正常小鼠作为正常对照。结果与结论:脂肪源性干细胞干预后急性肾损伤小鼠血清肌酐、尿素氮水平降低,肾组织病理改变及肾小管上皮细胞的凋亡病变减轻,肾组织炎症因子RANTES、肿瘤坏死因子α表达降低,白细胞介素10表达升高;其中低氧诱导因子1α基因修饰的脂肪源性干细胞对肾组织细胞凋亡及炎症因子表达作用更明显。免疫荧光染色可见移植的脂肪源性干细胞的存活,但未见其向肾小管上皮细胞转化。结果表明脂肪源性干细胞移植可改善急性肾损伤小鼠的肾脏结构和功能,经低氧诱导因子1α基因修饰后的脂肪源性干细胞作用更显著。
- 王巍巍姜燕王葳程劲张金元
- 关键词：干细胞脂肪间充质干细胞低氧诱导因子1Α基因修饰急性肾损伤细胞移植干细胞移植
- 携带增强绿色荧光蛋白的慢病毒载体感染人脂肪源性干细胞的有效性被引量：3
- 2010年
- 背景:细胞移植前,将目的基因转染干细胞可增强细胞治疗效果。但要实现目的基因的高效转移并适度表达,载体系统的选择是关键。目的:将携带绿色荧光蛋白的慢病毒载体感染人脂肪源性干细胞,检测病毒感染效率及感染后的细胞活力。方法:利用脂质体转染法获取慢病毒原液。设定不同感染复数(1,5,10,15,20),将带有增强绿色荧光蛋白的慢病毒载体感染人脂肪源性干细胞。荧光显微镜下观察病毒转染后人脂肪源性干细胞内增强绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪测定病毒感染效率。茜素红染色及油红 O 染色鉴定病毒转染后人脂肪源性干细胞的多向分化潜能。MTT 法检测转染后人脂肪源性干细胞的增殖情况。结果与结论:随病毒感染时间及感染复数值的增加,人脂肪源性干细胞内绿色荧光表达明显增强,感染后第 3 天,感染复数为 20 时人脂肪源性干细胞内可见明显绿色荧光表达,病毒感染效率为 60%;第 5～7 天,病毒感染效率可达 90%～95%。转染后人脂肪源性干细胞经成骨及成脂诱导液培养后,茜素红染色及油红 O 染色阳性,表明病毒感染未影响人脂肪源性干细胞的多向分化能力。病毒感染后,人脂肪源性干细胞的增殖能力未受明显影响。说明携带增强绿色荧光蛋白的慢病毒载体可以有效感染人脂肪源性干细胞。
- 王巍巍张金元
- 关键词：慢病毒载体转染细胞活力
- 干细胞移植在急性肾损伤中的应用及研究进展被引量：1
- 2012年
- 背景:干细胞移植治疗急性肾损伤是近年来研究的热点,不同来源的干细胞在治疗急性肾损伤方面都取得了很大的进展。目的:对干细胞生物学特性、干细胞的临床研究、不同来源的干细胞治疗急性肾损伤的实验性研究、存在问题及前景进行综述。方法:应用计算机检索中国学术期刊全文数据库(CNKI)和Pubmed数据库2001-01/2012-02关于干细胞移植治疗急性肾损伤的文章,检索主题词"干细胞,移植,肾脏疾病,急性肾损伤"或"stem cell,transplantation,kidney disease,acute kidney injury"。初检索到205篇文献,据纳入标准保留41篇进行分析、综述。结果与结论:干细胞移植是一种尝试用于急性肾损伤治疗的新方法,可以改善肾功能的损伤,加快肾脏修复。虽然仍存在不少有待解决的问题,但干细胞移植仍以其传统方法无法比拟的优势在急性肾损伤领域展现了诱人的应用前景。
- 王葳王巍巍张金元
- 关键词：急性肾损伤干细胞移植胚胎干细胞成体干细胞诱导性多能干细胞
- 黄芪甲苷对脂肪源性干细胞体外生物学行为的影响被引量：11
- 2013年
- 目的探讨黄芪甲苷(Astragaloside IV,Ast)对体外培养人脂肪源性间充质干细胞(human adipose-derived mesen-chymal stem cells,hADSCs)生物学行为的影响。方法应用CCK8和PCNA法检测不同浓度和时间Ast孵育对hADSCs增殖情况的影响,选取出Ast最适干预条件并对hADSCs进行培养,观察药物干预后细胞形态、表面标志物、成骨及成脂分化潜能。结果 CCK8和PCNA结果均显示,Ast 20 mg.L-1干预48 h后细胞增殖最为明显,进一步选取Ast20 mg.L-1干预hADSCs 48 h,与对照组相比,两组细胞CD29、CD44、CD105的阳性率均为96%-99%;两组细胞成骨诱导与成脂诱导结果也无差异。结论 Ast可促进ADSCs增殖,以20 mg.L-1、孵育48 h为最适干预条件,且该条件干预后并不影响hADSCs细胞形态,表面标志物水平及多向分化能力。
- 王葳姜燕王巍巍张金元
- 关键词：黄芪甲苷脂肪源性干细胞细胞表面标志成骨分化成脂分化
- 慢病毒载体介导的低氧诱导因子-1α在脂肪源性干细胞中的表达被引量：2
- 2011年
- 目的构建携带有增强绿色荧光蛋白（EGFP）和低氧诱导因子-1α（HIF-1α）的重组慢病毒载体，并感染人脂肪源性干细胞（hADSCs）。方法重组慢病毒载体Lenti—hHIF-1α-EGFP转染293T细胞，进行病毒包装并测定病毒滴度。按照MOI=20将Lenti—hHIF-1α-EGFP转染hADSCs，流式细胞仪分选EGFP标记的细胞。对转染后的hADSCs进行多向分化能力鉴定，并检测hADSCs内hHIF-1α的表达。结果病毒滴度为5×10^7pfu／ml。Lenti—hHIF-1α—EGFP转染hADSCs后第3天，荧光镜下观察转染效率70％，经流式细胞仪分选后，98％以上的细胞均有EGFP的表达。转染后的hADSCs茜素红染色及油红O染色阳性，表明hADSCs仍具有多向分化的潜能。hADSCs可以高表达HIF-1α。结论成功构建带有报告基因EGFP和目的基因hHIF-1α的慢病毒表达系统，并以慢病毒为载体将hHIF-1α整合到hADSCs中实现其高效表达。
- 王巍巍张金元王葳
- 关键词：慢病毒载体低氧诱导因子-1Α脂肪源性干细胞转染
