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双层壳聚糖与HAP复合支架的初步研究被引量：10: 2008年; 目的探讨双层壳聚糖(chitosan,CS)/HAP复合支架作为骨软骨组织工程支架的可行性,并结合兔自体BMSCs修复骨软骨缺损。方法采用冻干法和烧结法制作双层CS/HAP复合支架,检测其理化特性。取日本大耳白兔骨髓4～6mL,全骨髓培养法分离纯化BMSCs,并鉴定。调整第2代BMSCs细胞密度为2×107个/mL,应用纤维蛋白胶种植技术,接种至双层CS/HAP复合支架,体外构建细胞-支架复合物。取36只日本大耳白兔,于右侧膝关节股骨下端外侧髁负重区,作一直径4mm、深3mm的圆柱形缺损,制备兔膝关节骨软骨缺损模型。根据缺损区植入物的不同,分为A、B、C3组(n=12)。A组:植入细胞-支架复合物;B组:植入双层CS/HAP复合支架;C组:不植入任何材料,作为空白对照组。术后6、12周取材,行大体及组织学观察,采用改良Wakitani法评分。结果双层CS/HAP支架CS层孔隙率为76.00%±5.01%,孔径为200～400μm,平均300μm,孔洞相通;HAP层孔隙率为72.00%±4.23%,孔径为200～500μm,平均350μm,孔洞相通,结合部结合好。全骨髓法培养BMSCs,第7天可见集落形成,14d传代;免疫组织化学检测示CD44(+)和CD45(—)。大体观察和组织学检测显示,A组基本修复软骨缺损,骨缺损修复不良,有骨小梁长入;B、C组骨、软骨缺损修复不良,组织学检测以纤维组织或无新生组织形成,软骨及骨缺损均明显存在。术后6、12周,A组改良Wakitani评分分别为(5.17±1.17)分和(3.20±0.75)分,均优于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论双层CS/HAP复合支架可作为骨软骨组织工程支架,复合BMSCs可修复兔关节软骨与骨缺损,重建关节解剖结构。; 张华亮王文良初殿伟刘英杰关静; 关键词：BMSCS 骨软骨缺损

SPIO标记骨髓间充质干细胞和软骨细胞共培养的研究被引量：6: 2011年; [目的]探讨SPIO标记骨髓间充质干细胞和软骨细胞共培养的可行性,为临床修复关节软骨损伤寻找新途径。[方法]分离、扩增新西兰大白兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)和软骨细胞,根据SPIO标记(50μg/m l)和不同培养环境(共培养、单独培养)分4组,每天在倒置显微镜观察共培养后BMSCs的形态变化,共培养14 d后,免疫组化检测Ⅱ型胶原表达情况,阿利新蓝法检测蛋白多糖(GAG)表达水平。[结果]共培养7 d后标记的部分BM-SCs变圆,14 d时BMSCs形态高度分化与成熟软骨细胞相似,其蛋白多糖和Ⅱ型胶原的基因转录和蛋白表达均增高,明显优于对照组,差异具有显著性意义(P<0.01)。[结论]1.软骨细胞微环境能有效诱导BMSCs向软骨细胞分化;2.SPIO可以安全、有效地标记BMSCs。; 詹兴旺姜艳王文良; 关键词：SPIO 骨髓间充质干细胞软骨细胞共培养

自体骨髓间充质干细胞复合壳聚糖／羟基磷灰石支架修复兔膝骨软骨缺损被引量：9: 2009年; 目的探讨骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells，BMSCs）复合壳聚糖（chitosan，CS）／羟基磷灰石（hydroxyapatite，HA）支架修复兔膝关节局部骨软骨缺损。方法选健康日本大耳白兔36只，2--3月龄，体重1．7--2．0kg，每只抽取自体骨髓4--6ml，体外分离培养BMSCs后以2×10^7／ml密度植于CS／HA支架上体外培养10h，制成BMSCs-CS／HA支架复合物。将36只实验动物手术制成右膝股骨外侧髁负重区骨缺损模型后，随机分成A、B、C3组，每组12只。A组植入BMSCs-CS，HA复合物，B组植入单纯CS-HA支架；C组不作任何植入，为空白对照组。分别于术后6周、12周各处死6只动物，取材后进行大体、组织学观察.根据改良Wakitani评分标准进行评分，评估软骨组织的修复情况，并行成组设计方差分析。结果A组术后6周即可重建关节软骨缺损；修复软骨在观察期内逐渐变厚，软骨下骨有少量骨修复；术后12周透明软骨样修复，表面光整，与周围软骨色泽相近，软骨下骨有部分修复。而B组和C组12周时缺损区仍为纤维软骨样纤维组织修复，色泽浅黄。术后6、12周各组组织学半定量评分显示：股骨髁负重区修复A组评分明显优于B、C组（F=27．26，P〈0．05）。结论自体BMSCs复合CS／HA支架在体内环境下可形成透明软骨修复兔膝关节负重区骨软骨缺损。; 王文良张华亮初殿伟王彦鹏周洲王景贵; 关键词：间质干细胞壳聚糖羟基磷灰石类

兔骨髓间充质干细胞/壳聚糖-胶原支架复合体构建软骨组织工程支架被引量：8: 2009年; 背景:软骨组织工程的核心是利用少量的细胞经体外培养、扩增后,在一定环境下附着在三维多孔支架上,再将细胞/支架复合体移植到体内形成新的组织。目的:拟构建兔骨髓间充质干细胞/壳聚糖-胶原支架复合体,探讨该支架作为软骨组织工程支架的可行性。设计、时间及地点:细胞-支架学体外观察,于2008-03/2009-02在武警医学院生物化学教研室完成。材料:日本大耳白兔6只用于分离培养骨髓间充质干细胞。医用壳聚糖粉末为山东奥康生物科技有限公司产品。Ⅰ型胶原为Sigma公司产品。方法:取3%的壳聚糖和2%的胶原混合的醋酸溶液,倒入72孔板内,-20℃预冷冻10h,冻干机冷冻抽干24h制作成壳聚糖-胶原支架。取第3代兔骨髓间充质干细胞,以1×109L-1密度接种于支架内,构建细胞/支架复合体。主要观察指标:傅里叶红外光谱、扫描电镜、液体置换法测定支架的理化性质,观察三维培养后细胞在支架上的生长情况。结果:壳聚糖-胶原支架孔径为160～380μm,平均为270μm,孔相通性好,支架孔隙率为(86.00±5.12)%。傅里叶红外光谱仪测定数据表明复合支架组成物有典型的壳聚糖、胶原峰,未发现有聚乙二醇峰。细胞/支架共培养24,48,72h后,骨髓间充质干细胞可渗入支架多孔结构内,并黏附在支架上成簇生长,部分细胞已与支架融合。结论:壳聚糖-胶原支架基本符合软骨组织工程支架要求,能够作为种子细胞的承载体。; 初殿伟王玮陈立军王文良张华亮杨亮李建鑫; 关键词：骨髓间充质干细胞软骨组织工程

骨髓间充质干细胞的三维培养被引量：2: 2011年; 目的:研究三维培养环境下骨髓间充质干细胞的生长情况,探讨骨髓间充质干细胞复合支架构建组织工程软骨的可行性。方法:全骨髓培养法分离骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),免疫细胞化学测定其细胞表面抗原CD44、CD45,对BMSCs进行鉴定;冻干法制备壳聚糖(Chitosan,CS)支架,扫描电镜观测支架孔径;取BMSCs复合CS支架,通过三维培养观察BMSCs在CS支架上不同时段的生长情况。结果:三维培养环境下骨髓间充质干细胞生长良好,细胞在支架上分泌大量细胞外基质,并与支架黏附良好。结论:骨髓间充质干细胞可作为组织工程的种子细胞,构建组织工程软骨。; 初殿伟王玮景士忠陈立军王文良; 关键词：骨髓间充质干细胞壳聚糖支架

骨髓间充质干细胞在骨软骨缺损修复中的研究现状被引量：4: 2008年; 初殿伟王玮王文良; 关键词：骨髓间充质干细胞骨软骨缺损

骨软骨组织工程支架的研究现状及发展趋势被引量：3: 2009年; 目前，随着骨软骨组织工程的发展，为临床上骨软骨缺损的修复带来了新希望。应用自体细胞、支架、生长因子可以修复骨、软骨的缺损；选取具有生物相容性和可吸收性的复合支架可为细胞提供暂时的支持、黏附、生长环境，促进骨软骨缺损的修复。就骨软骨组织工程支架的分类、特性、应用以及存在的问题和发展趋势作一综述。; 初殿伟王玮张华亮王文良; 关键词：骨软骨

双层壳聚糖/羟基磷灰石复合支架的制备及性能研究被引量：4: 2008年; 目的:探索制备一种壳聚糖(CS)/羟基磷灰石(HA)双层复合支架的方法,对支架的理化性质进行检测。方法:在3%(m/V)壳聚糖溶液中加入一定量的聚乙二醇,离心去除气泡。将HA支架放入模具中,取配好的壳聚糖溶液,倒入模具中,放入冰箱冷冻,在冷冻抽干机中冻干,制成HA/壳聚糖(CS)支架。采用外观、红外光谱、电镜、乙醇替代、生物力学测定等方法检测支架的材料、内部结构(孔径、孔相通性)、孔隙率、力学性能,考察将其作为骨软骨组织工程支架材料应用的可行性。结果:双层复合支架外观上模拟骨软骨组织学结构,材料为壳聚糖、羟基磷灰石,平均孔径分别为CS层300μm,HA层350μm,孔相通性好,CS孔隙率为(76.00±5.01)%,HA孔隙率为(72.00±4.23)%。CS支架弹性模量为(2.8±0.5)MPa,HA支架的弹性模量为(150±11)MPa。结论:壳聚糖(CS)/羟基磷灰石(HA)双层复合支架符合骨软骨组织工程支架要求,具有较好的应用前景。; 张华亮王文良关静刘英杰初殿伟张西正; 关键词：壳聚糖羟基磷灰石

急性髌骨脱位非手术治疗与手术治疗的Meta分析被引量：1: 2019年; 目的分析急性髌骨脱位患者手术治疗和非手术治疗的临床效果。方法计算机检索Pub Med、Embase、Springer、Cochrane图书馆、中国知网、谷歌学术等数据库(建库至2018年10月)中比较非手术和手术治疗急性髌骨脱位的临床随机对照研究,经过严格的质量评价后使用Rev Man 5.3软件进行Meta分析。临床指标为Kujala评分、脱位复发率、再次手术率。结果共纳入10篇文献。Meta分析结果显示:急性髌骨脱位两种治疗方法在Kujala评分和再次手术率方面差异无统计学意义,手术治疗组脱位复发率在短期随访组(RR=2.87,95%CI:1.75~4.69,P<0.0001)和长期随访组(RR=1.80,95%CI:1.62~3.03,P=0.03)均低于非手术治疗组。结论手术治疗急性髌骨脱位较非手术治疗不易复发;两组疗效在Kujala评分、再次手术率方面差异无统计学意义。; 刘数敬喻瑛瑛陆广旭王文良; 关键词：急性髌骨脱位非手术治疗手术治疗 META分析

壳聚糖/羟基磷灰石支架修复骨软骨缺损的实验研究被引量：18: 2008年; [目的]探讨双层壳聚糖（chitosan CS）/羟基磷灰石复合支架（hydroxyapatite HA）修复兔骨软骨缺损的可行性。[方法]采用冻干法和烧结法制作双层壳聚糖（CS）/羟基磷灰石（HA）复合支架,以骨髓间充质干细胞为种子细胞,运用纤维蛋白胶种植技术,以双层壳聚糖（CS）/羟基磷灰石（HA）复合支架为载体,修复骨软骨缺损,实验分3组,A组：BMSc＋支架,B组：单纯支架,C组：未处理。将修复材料植入骨软骨缺损模型,分别于6、12周取材,进行大体观察,组织学检测,改良Wakitani法评分,经统计学处理,比较各组修复效果差异（P〈0.05）。[结果]（1）CS/HA支架CS层孔隙率为76%±5.01%,孔径为200～400μm,平均为300μm左右,孔相通性好,HA层孔隙率为72%±4.23%,孔径为200～500μm,平均为350μm左右,孔相通性好,结合部结合好;（2）P2骨髓间充质干细胞较纯,扫描电镜观察MSCs附着在复合支架上。大体观察和组织学检测显示,A组基本修复软骨缺损,骨缺损有骨小梁长入。B、C组骨软骨缺损修复不良,组织学检测以纤维性组织或无新生组织形成,软骨及骨缺损均明显存在,改良Wakitani评分显示A组在6周、12周2个时间点的各项评分结果,均优于B、C组,且差异有统计学意义（P〈0.05）。[结论]双层壳聚糖（CS）/羟基磷灰石（HA）复合支架可作为骨软骨组织工程支架,结合BMSc可修复软骨与骨的缺损,重建关节的解剖结构和功能。; 王文良张华亮关静初殿伟; 关键词：骨髓间充质干细胞骨软骨缺损

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国家自然科学基金(30740089)

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