国家公益性行业科研专项(201305015)
- 作品数：9 被引量：41H指数：4
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- 相关领域：轻工技术与工程农业科学生物学化学工程更多>>
- 高产漆酶真菌的筛选及产酶条件研究被引量：4
- 2013年
- 目的:对筛选得到的漆酶高产菌株进行鉴定和产酶条件优化,以提高漆酶活力。方法:采用愈创木酚-PDA和RB亮蓝-PDA平板初筛,得到1株产漆酶能力较强的菌株HYB07,对其进行18S rDNA序列分析,并结合菌丝和菌落形态观察,鉴定HYB07为一色齿毛菌(Cerrena unicolor)。以高氮低碳高无机盐培养基(LM3)为基础培养基,对其中的碳源、氮源、诱导物和培养基初始pH值进行优化,并研究其发酵产酶条件(接种量、发酵温度、转速、装液量),得到HYB07菌株的最佳产酶条件是:葡萄糖2%,酒石酸铵1.5%(ABTS 0.05 mmol/L,培养基初始pH 5.0,接种量8%(体积分数),温度25℃,转速200 r/min,装液量60 mL/250 mL,发酵时间6 d。结论:在上述条件下发酵,漆酶最高活力达79 733 U/L,比采用LM3培养基(56 356 U/L)提高了41.5%。Cu2+对漆酶的合成影响显著,缺乏Cu2+时,漆酶活力下降了87.64%。
- 林娟兰帅琼杨捷李仁宽叶秀云
- 关键词：真菌漆酶产酶条件
- 高产褐藻胶裂解酶菌株的筛选及发酵条件优化被引量：15
- 2015年
- 采用透明圈初筛方法得到一株产褐藻胶裂解酶菌株B1,通过形态观察和16S r DNA序列分析鉴定该菌株为假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas sp.)。通过单因素实验对菌株B1产酶条件进行优化,最佳培养基组成为:褐藻酸钠1%,氯化铵0.2%,Na Cl 3%,KH2PO40.02%,Mg SO40.01%,Ca Cl2·2H2O 0.1%,初始p H5.5。最佳的培养条件:装液量75 m L,培养温度30℃,摇床转速180 r/min,培养22 h。在该条件下,褐藻胶裂解酶最高酶活力提高到71.94 U/m L,提高了72.11%。
- 严芬连燕萍杨光王培松吴晨烁陈宁辛
- 关键词：褐藻胶裂解酶假交替单胞菌
- 产木聚糖酶海洋微生物的筛选与诱变育种被引量：6
- 2015年
- 以自制木聚糖为初筛培养基的唯一碳源,从多个海洋来源样品中一共筛到60株有透明圈且形态各异的菌株,摇瓶发酵结果显示,38株具有产木聚糖酶能力,其中B659菌株产酶能力最高,酶活力为525.3 U·m L-1.结合B659菌株的形态特征和16S r DNA序列分析鉴定该菌株属于Bacillus属.对B659菌株进行紫外诱变,筛选得到酶活提高13.9%且稳定遗传的突变菌株G3-17;对G3-17菌株进一步进行微波诱变得到酶活较G3-17菌株高出11.6%且稳定遗传的突变菌株W1-40.对B659菌株和W1-40突变菌株进行发酵试验,72 h时W1-40菌株的酶活力达到645.2 U·m L-1,比B659菌株(517.9 U·m L-1)提高24.6%.
- 黄小云林娟林小洪王国增叶秀云
- 关键词：海洋微生物木聚糖酶诱变
- 皱纹盘鲍亮氨酸氨肽酶基因cDNA克隆及表达分析被引量：1
- 2017年
- 利用PCR和RACE技术从皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)肌肉中克隆亮氨酸氨肽酶基因cDNA序列,并对其结构进行分析。皱纹盘鲍亮氨酸氨肽酶(Haliotis discus hannai leucine aminopeptidase,Hdh-LAP)cDNA全长共3251 bp,包含5'非编码区(5'UTR)56 bp,3'非编码区(3'UTR)651 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)2544 bp,共编码847个氨基酸残基。多序列比对结果显示,该氨基酸序列与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)、霸王莲花青螺(Lottia gigantea)、囊舌虫(Saccoglossus kowalevskii)的亮氨酸氨肽酶序列相似性分别为85%、68%和61%。预测Hdh-LAP基因编码蛋白质的相对分子质量为95.09 ku,理论等电点为5.16。Hdh-LAP蛋白质的二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,其中α-螺旋占38.02%,无规则卷曲占30.11%,β-折叠占22.43%,β-转角占9.45%。Hdh-LAP主要分布在细胞质(59.2%)、线粒体(10.0%)和溶酶体(10%)中,推测其可能在能量代谢和辅因子的生物合成过程中发挥信号转导和转录因子调控的作用。系统发育关系分析结果显示,Hdh-LAP与牡蛎亮氨酸氨肽酶关系最近。荧光定量PCR结果表明,Hdh-LAP基因在鲍肌肉、肝胰腺、性腺、血淋巴细胞、腮、外套膜等6个组织中均有表达,在血淋巴细胞中表达量最高,肌肉次之,性腺最少。
- 胡健健陈玉磊段雪昆李越张凌晶刘光明曹敏杰
- 关键词：皱纹盘鲍CDNA克隆生物信息学
- 不同搅拌器类型对齿毛菌发酵产漆酶的影响
- 2014年
- 【目的】白腐菌Cerrena unicolor Y-G07是一种不产孢子的丝状真菌,其漆酶合成与生长相偶联。应用于单细胞微生物发酵的搅拌器并不适用于白腐真菌。在此,综合考虑溶氧效果和剪切力作用,研究不同搅拌器类型对白腐菌Cerrena unicolor Y-G07发酵生产漆酶产量的影响。【方法】针对Y-G07菌株生长过程需氧量大,且对剪切力敏感的特性,订制5种不同类型的搅拌器(径向流、轴向流等),在通气已控制在设备最大量程及转速优化的前提下,研究Y-G07在发酵生产过程中使用不同类型搅拌器对菌丝生长形态、生长速度、溶氧情况、糖代谢和漆酶合成的影响。【结果】Cerrena unicolor Y-G07菌株对不同类型搅拌器产生的发酵液流态性质和剪切力敏感,表现在菌丝体的生长形态、细胞浓度差异较大,且生长周期改变,从而影响漆酶的合成。采用六折叶DT602搅拌器最有利于该菌株形成致密度合适的网状菌丝体,菌丝体细胞浓度高,断裂少、生长状况好,漆酶的单位产量可达690 U/m L,相对于普通使用的六叶平直叶搅拌器(448 U/m L)提高了54%。【结论】选择合适的搅拌器类型有利于好氧但对剪切力敏感的微生物发酵。
- 余孙靖王国增叶秀云吕橄林娟
- 关键词：丝状真菌漆酶剪切力搅拌器
- 响应面法优化鲍鱼内脏中牛磺酸提取工艺的研究被引量：4
- 2016年
- 以鲍鱼内脏为原料,采用单因素及响应面分析法(RSM)研究提取温度、提取时间、液固比、提取次数4个因素及其交互作用对牛磺酸提取量的影响,并利用高效液相色谱法以及扫描电子显微镜(SEM)对纯化的牛磺酸进行分析。建立各因素与牛磺酸提取量关系的数学回归模型,确定最佳水提条件为:提取温度94℃、提取时间140 min、固液比1∶4、提取次数4次。在此条件下,鲍鱼内脏中牛磺酸提取量为(12.82±0.23)mg·g^(-1),与数学回归模型的预测值13.00 mg·g^(-1)基本一致,回归模型能很好地预测鲍鱼内脏中牛磺酸的提取量。采用最优水提条件对鲍鱼内脏中牛磺酸进行水提,并经乙醇抽提、蒸发浓缩、沉淀、活性炭处理、结晶等步骤制备得到牛磺酸晶体,经高效液相色谱法检测其纯度为96.5%。通过扫描电子显微镜(SEM)观测,天然牛磺酸晶体呈细针状,表面较为粗糙。
- 崔璨章骞张凌晶翁凌李钰金雷桂英曹敏杰
- 关键词：牛磺酸响应面法扫描电子显微镜
- 内切葡聚糖酶高产菌株的诱变选育被引量：4
- 2013年
- 【目的】建立里氏木霉(Trichoderma reesei)高产突变菌株的快速筛选方法,选育出高产内切葡聚糖酶的突变株。【方法】对里氏木霉T306菌株的初筛培养基进行优化,建立快速筛选方法;通过紫外诱变手段选育内切葡聚糖酶高产突变菌株,并对突变菌株的产酶培养基进行优化。【结果】在初筛培养基中添加浓度为0.1%(W/V)的乳糖、蛋白胨及脱氧胆酸钠有利于菌株的筛选。诱变后筛选出菌落形态发生明显变化的内切葡聚糖酶高产突变株0516,其羧甲基纤维素酶活力(CMC酶)较出发菌株提高了38.9%。其产酶培养基经优化后,得到最适碳、氮源分别为:乳糖1.50%、硫酸铵0.14%、尿素0.05%、蛋白胨0.10%,优化后CMC酶活力达64.2 U/mL,较优化前提高了2.3倍。【结论】建立了里氏木霉高产突变菌株的快速筛选方法,通过紫外诱变育种获得了产内切葡聚糖酶能力高且遗传稳定的突变株0516。
- 张素敏陈彩芳叶秀云林娟
- 关键词：里氏木霉内切葡聚糖酶紫外诱变
- 海鲍分离微生物Acinetobacter sp.酯酶基因的表达和酶学性质被引量：2
- 2014年
- 【目的】克隆源于海鲍内脏中一株不动杆菌Acinetobacter sp.的酯酶基因estA,并对其进行重组表达和性质研究。【方法】利用分子生物学技术克隆出酯酶基因estA并构建pPICZα-C-estA重组表达载体,并通过电转化方法将重组质粒转入毕赤酵母X33中;通过甲醇诱导培养重组菌获得重组酯酶,并对重组酯酶进行生化表征。【结果】克隆得到的estA基因序列全长912 bp,编码304个氨基酸;重组X33发酵上清液中酯酶酶活力达到1 200 U/L,重组酯酶的分子量约为33.7 kD;酶学性质研究表明重组酯酶催化底物对硝基苯乙酸乙酯水解反应的最适pH和温度为8.0和40?C,在pH 8.0-10.0温度及小于60?C时具有较好的稳定性。【结论】成功克隆了海洋来源的不动杆菌酯酶基因并在Pichia pastoris中实现了高效表达。
- 张秋芳李仁宽林娟叶秀云
- 关键词：不动杆菌酯酶毕赤酵母克隆表达
- 鲭鱼罐头蒸煮液蛋白酶解产物的生物活性分析被引量：5
- 2018年
- 以鲭鱼罐头蒸煮液为原料,采用生物酶解方法制备活性肽,以实现鱼罐头加工废弃液的高值化利用.研究结果表明,采用复合酶(碱性蛋白酶和胰蛋白酶)分段酶解,得到相对分子质量MW<1 ku的组分占50%,高于碱性蛋白酶(30%)和胰蛋白酶(28%)单酶水解效果.进一步采用超滤方法分离酶解产物,得到不同相对分子质量范围的3个组分,其中MW<1 ku的P1组分的抗氧化活性和ACE抑制效果最好.
- 林云林娟许鑫琦毕丹丹郭耀湘
- 关键词：鲭鱼蒸煮液ACE抑制活性
