湖南省自然科学基金(13JJ4078)
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
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- 丁酸钠下调CNE2鼻咽癌细胞IFN-γ诱导的吲哚胺2,3双加氧酶表达并促进其乙酰化和泛素化
- 2015年
- 目的探讨丁酸钠(NaB)对CNE2鼻咽癌细胞γ干扰素(IFN-γ)诱导的吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)表达调控及分子机制。方法采用Western blot法、免疫共沉淀等方法检测鼻咽癌细胞内IDO的表达及乙酰化、泛素化修饰情况。结果与单独加IFN-γ对照组相比,Western blot结果显示,IFN-γ和Na B联合处理的CNE2细胞IDO蛋白表达增加;免疫共沉淀实验结果表明,联合处理CNE2细胞乙酰化IDO水平和泛素化IDO水平均明显增高;与NaB和IFN-γ联合处理的CNE2细胞相比,NaB、IFN-γ和硼替佐米(bortezomib)联合处理的CNE2细胞的IDO表达量增加。结论 NaB能以剂量依赖性的方式下调鼻咽癌细胞内IFN-γ诱导的IDO表达,IFN-γ和Na B联合处理促进IDO的乙酰化和泛素化。
- 王霞张秋桂邱瑜谢婉莹张凯华江冠民
- 关键词：丁酸钠肿瘤免疫耐受乙酰化泛素化
- 小鼠成纤维细胞激活蛋白多克隆抗体的制备及应用
- 2014年
- 目的:表达和纯化小鼠成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)二肽基肽酶催化核心序列(FAPαc)融合蛋白(His-FAPαc),制备兔抗小鼠FAPα多克隆抗体,并用此抗体检测FAPα在肿瘤细胞和成纤维细胞以及肿瘤间质中的表达情况。方法:将本实验室构建好的原核表达质粒pET28a(+)-FAPαc转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达目的蛋白His-FAPαc;用纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,获得兔抗小鼠FAPα多克隆抗体;用免疫印迹法和酶联免疫吸附试验检测该多克隆抗体与重组蛋白His-FAPαc的反应性及检测该多克隆抗体的效价,并用该抗体检测FAPα在肿瘤细胞和成纤维细胞以及肿瘤间质中的表达情况。结果:HisFAPαc融合蛋白可与兔抗小鼠FAPα多克隆抗体特异性结合;该多克隆抗体的效价高,特异性好,并且能检测小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryo fibroblast cells;MEF)及结肠癌和乳腺癌的间质细胞高表达FAPα的全长序列蛋白。结论:制备的兔抗小鼠FAPα多克隆抗体能够有效地识别小鼠胚胎成纤维细胞和肿瘤间质细胞表达的FAPα蛋白,为研究FAPα在肿瘤的发生、发展及转移中的作用和以FAPα为靶点而开展的的抗肿瘤研究奠定基础。
- 江冠民谢婉莹张坤水邱瑜张秋桂杜军
- 关键词：成纤维细胞激活蛋白多克隆抗体肿瘤转移肿瘤间质
- IDO启动序列GAS和ISRE荧光素酶报告基因载体构建及其活性检测
- 2014年
- 目的构建pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS两个荧光素酶报告基因载体,并对其进行生物活性鉴定。方法通过人工合成调控吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的启动序列ISRE4(4个串联的ISRE序列)和GAS7(7个串联的GAS序列),与pGL3-Enhancer连接成重组体pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-EnhancerGAS7,通过转化扩增,筛选出阳性克隆,并通过酶切、测序及生物学活性检测鉴定构建好的荧光素酶报告基因载体。结果成功地构建了pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7两个荧光素酶报告基因载体,在IFN-γ的诱导下,能启动细胞内荧光素酶的表达。结论 pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7的荧光素酶报告基因载体的成功构建为研究IDO蛋白的表达调控机制和以IDO为靶标的抗肿瘤免疫耐受药物快速高通量的筛选提供了重要的研究工具。
- 江冠民匡艳华邱瑜谢婉莹张秋桂欧阳新平
- 关键词：荧光素酶报告基因肿瘤免疫耐受
- 姜黄素抗黑色素瘤分子机制研究进展被引量：2
- 2015年
- 黑色素瘤是源于皮肤,粘膜,眼和中枢神经系统色素沉着区域的黑色素细胞的恶性肿瘤,虽然其发病率不高,但恶性程度极高,并且瘤细胞很早就能发生侵袭与转移,从而使患者预后很差。目前黑色素瘤的治疗方式仍以外科手术治疗为主,联合放疗、化疗、中药的综合治疗方案,然而有关黑色素瘤的中医中药治疗方面的研究尚处于起步阶段。最新研究表明,姜科植物属姜黄、郁金、莪术等的活性成分之一姜黄素具有广泛的抗癌、抗炎、抗氧化等药理特性,特别是姜黄素在黑色瘤的预防和治疗中起到不容忽视的作用,姜黄素主要通过抑制黑色素瘤细胞的增殖,促进其凋亡等途径参与黑色素瘤细胞的消亡。本文主要针对姜黄素抗黑色素瘤及其分子机制研究进展作一综述。
- 谢婉莹欧阳鑫江冠民张秋桂
- 关键词：姜黄素黑色素瘤细胞凋亡分子机制
- Snail启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其应用
- 2013年
- 目的构建Snail启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic-Snai1-luc并对其进行生物活性的鉴定及其初步的应用研究。方法通过PCR技术从人血液基因组中钓出我们需要的具有启动子活性的Snail片段,双酶切后与双酶切的pGL3-Basic空载体连接成重组体pGL3-Basic-Snai1-luc,通过转化扩增,筛选出阳性克隆,并通过酶切,测序及生物学活性检测鉴定构建好的荧光素酶报告基因载体。结果成功地构建了pGL3-Basic-Snai1-luc荧光素酶报告基因载体,并在CNE2细胞内鉴定了其在TGF-β1的诱导下,能启动荧光素酶的表达。此外,笔者通过Western blotting检测表明TGF-β1能显著性的诱导Snail蛋白的表达,充分证明了我们构建的pGL3-Basic-Snai1-luc是具有生物学功能的。结论具有生物活性的pGL3-Basic-Snai1-luc的构建成功为研究Snai1在EMT过程中的调控机制研究和以snail为靶标的抗肿瘤药物快速高通量的筛选提供了非常重要的研究工具。
- 江冠民李玲玲张坤水谢婉莹张秋桂杜军
- 关键词：SNAIL肿瘤转移启动子
