中国博士后科学基金(20070410996)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：聂东宋赵劲风刘宇更多>>
- 相关机构：湖南理工学院中南大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 丙型肝炎病毒截短型核心C区和NS_3区融合蛋白(C_8-NS_3)的原核表达被引量：1
- 2010年
- 通过RT-PCR从HCV全长基因组中分别克隆HCV核心区和NS3非结构区的部分优势表面抗原的基因片段,运用重叠延伸PCR技术将它们拼接成融合基因,将融合基因再克隆到表达载体pTrcHis2 TOPO TA中,转化大肠杆菌Top10,阳性克隆经IPTG诱导融合蛋白的表达,表达产物经15%SDS-PAGE鉴定,重组蛋白经His标签纯化.经IPTG诱导可高效表达分子量约为14.4KD的融合抗原,重组蛋白主要以可溶性形式存在.经过纯化目的蛋白纯度达96.3%以上的,表达量约为550μg/mL.ELISA结果表明纯化蛋白具有良好的抗原性.
- 聂东宋刘宇冯惊涛胡道奇
- 关键词：丙型肝炎病毒抗原检测
- 丙型肝炎病毒多表位抗原的融合表达及抗原性分析被引量：1
- 2010年
- 目的表达HCV核心蛋白Core、非结构区NS3、NS4和NS5区的部分优势表面抗原的融合基因,为丙型肝炎病毒的检测提供合适抗原。方法通过RT-PCR从HCV全长基因组中分别克隆Core、NS3、NS4和NS5区的部分优势表面抗原的基因片段,运用重叠延伸PCR技术将它们拼接成融合基因,将融合基因再克隆到表达载体pBVIL-2中,转化大肠杆菌JM109,阳性克隆经42℃热诱导融合蛋白的表达,表达产物经SDS-PAGE及Westernblot鉴定。重组蛋白经阳离子交换和分子筛纯化。结果42℃诱导可高表达分子量约为43kD的融合抗原,重组蛋白主要以包涵体形式存在。经过纯化目的蛋白纯度达90%以上的,表达量约为886μg/mL。ELISA结果表明纯化蛋白具有良好的抗原性。结论HCV复合多表位抗原融合蛋白可作为HCV诊断抗原提供了靶抗原。
- 聂东宋冯惊涛胡道奇罗朝晖周见远赵劲风
- 关键词：丙型肝炎病毒蛋白表达抗原检测
