辽宁省自然科学基金(20072165)
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 相关作者：刘正娟翟娜王玉川白雪梅张莉更多>>
- 相关机构：大连医科大学附属第二医院嘉兴市第二医院沈阳市第一人民医院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNAi介导的SOCS3基因沉默对高脂肥胖大鼠瘦素抵抗的影响被引量：3
- 2012年
- 目的研究RNA干扰(RNAi)介导的细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)基因沉默对高脂肥胖大鼠瘦素抵抗的影响。方法选用5周的SD大鼠60只,随机分为3组,实验组:下丘脑注射SOCS3基因RNA干扰慢病毒(LV-shSOCS3),高脂饲料喂养;阴性组:下丘脑注射阴性序列慢病毒(LV-negtive),高脂饲料喂养;对照组:下丘脑注射生理盐水,高脂饲料喂养。饲养8周末,检测血总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇,放射免疫法检测血清瘦素,利用荧光实时定量PCR(real-time PCR)技术检测各组下丘脑内SOCS3和瘦素受体(OB-Rb)的mRNA表达水平。结果实验组体重、瘦素、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇低于阴性组和对照组(P<0.05)。实验组下丘脑的SOCS3mRNA水平低于阴性组和对照组(P<0.05)。实验组下丘脑的OB-RbmRNA水平高于阴性组和对照组(P<0.05)。而阴性组和对照组比较无差异(P>0.05)。结论下调SOCS3基因可以减轻高脂肥胖大鼠瘦素抵抗,对肥胖症可能有预防和治疗作用。
- 张旭刘正娟翟娜吴鸣滕懿群陈俊国骆秋龙陆燕
- 关键词：肥胖瘦素抵抗瘦素受体细胞因子信号转导抑制因子3
- 大鼠细胞因子信号转导抑制因子3基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定被引量：4
- 2010年
- 目的研究构建大鼠细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体的方法。方法根据大鼠SOCS3基因(NM053565),用Ambion在线软件选择3个靶序列,设计并合成包含各正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamHⅠ和XhoⅠ酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-Lenti-绿色荧光蛋白(GFP)(含U6启动子和GFP)连接产生pRNA-Lenti-SOCS3-GFP慢病毒重组质粒,然后分别转染C6大鼠神经胶质瘤细胞,通过荧光显微镜观察细胞转染情况,利用荧光实时定量PCR方法检测RNAi组(siRNA1、siRNA2、siRNA3),空白细胞组和阴性序列组(siRNA-Negative)SOCS3的表达情况,筛选出干扰效果最佳的重组质粒。此慢病毒重组质粒与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取系列稀释法测定慢病毒滴度。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。荧光实时定量PCR检测显示慢病毒重组质粒感染C6大鼠神经胶质瘤细胞后,与空白细胞组比较,3个RNAi组均不同程度地抑制SOCS3表达,其中siRNA1组抑制效果最佳,可使SOCS3 mRNA表达量下调达80%。系列稀释法检测慢病毒悬液的滴度为1.0×1010TU.L-1。结论运用pRNA-Lenti-GFP载体构建的pRNA-Lenti-SOCS3-GFP慢病毒载体可有效地抑制大鼠SOCS3的表达。大鼠SOCS3基因RNAi慢病毒载体的构建成功,为SOCS3相关疾病的深入研究和治疗奠定基础。
- 张旭刘正娟翟娜王玉川
- 关键词：细胞因子信号转导抑制因子3核糖核酸干扰慢病毒载体
- 慢病毒介导的RNAi对大鼠SOCS3基因表达的抑制作用
- 2011年
- 目的研究慢病毒表达载体介导的RNA干扰(RNAi)对大鼠下丘脑细胞中细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)的抑制作用。方法根据大鼠SOCS3基因(NM053565),用Ambion在线软件选择3个靶序列,设计并合成包含各正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamHⅠ和XhoⅠ酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-lenti-GFP连接产生pRNA-Lenti-SOCS3-GFP慢病毒重组质粒,与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取逐孔稀释滴度法测定病毒滴度,然后转染大鼠下丘脑细胞,通过荧光显微镜观察细胞转染情况,利用荧光实时定量PCR方法检测RNAi组(siRNA1,siRNA2,siRNA3)、空白细胞组和阴性序列组(siRNA-Negtive)中SOCS3的表达情况。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。系列稀释法检测慢病毒悬液的滴度为1.0×1010 TU/L。荧光实时定量PCR检测显示慢病毒感染大鼠下丘脑细胞后,与空白细胞组相比,3个RNAi组都有不同程度的抑制SOCS3表达,其中siRNA1组的抑制效果最好,可使SOCS3 mRNA表达下调达80%。结论构建的pRNA-Lenti-SOCS3-GFP慢病毒载体可有效地抑制大鼠SOCS3的表达,为以SOCS3基因为靶点的相关疾病的基因治疗研究奠定基础。
- 张旭刘正娟吴鸣滕懿群骆秋龙陈俊国陆燕章爱莲
- 关键词：细胞因子信号转导抑制因子3核糖核酸干扰慢病毒载体
- 高脂肥胖大鼠血清瘦素,胰岛素及下丘脑细胞因子信号转导抑制因子-3基因表达的研究被引量：9
- 2010年
- 目的观察高脂饮食肥胖大鼠血清瘦素,胰岛素水平及下丘脑细胞因子信号转导抑制因子-3基因(suppressors-of-cytokine-signaling 3,SOCS-3)表达变化及其关系,探讨高脂饮食肥胖大鼠引发瘦素抵抗及胰岛素抵抗的发生机制。方法以高脂饮食制备幼年雄性肥胖大鼠模型,采用放射免疫法检测各组大鼠血清瘦素、胰岛素及C肽浓度,葡萄糖氧化酶法检测血清葡萄糖水平,利用RT-PCR技术检测各组大鼠下丘脑SOCS-3基因表达水平。结果 (1)高脂饮食诱导的肥胖组大鼠体重明显高于对照组;(2)肥胖组大鼠血清瘦素、胰岛素,血糖及C肽水平明显升高,与对照组比较均有显著性差异;(3)肥胖组大鼠下丘脑SOCS-3的mRNA水平明显高于对照组;(4)肥胖组大鼠下丘脑内SOCS-3 mRNA水平分别与血清瘦素、胰岛素含量呈显著正相关。结论高脂饮食诱导的肥胖大鼠可出现瘦素抵抗和胰岛素抵抗以及SOCS-3基因表达上调。SOCS-3基因表达上调使瘦素及胰岛素受体后JAK-STAT信号转导通路抑制,可能参与了瘦素及胰岛素抵抗的发生机制。
- 张旭刘正娟翟娜
- 关键词：肥胖瘦素抵抗
- 细胞因子信号转导抑制因子3表达下调抵抗高脂饮食诱导肥胖的作用机制研究被引量：4
- 2012年
- 目的 探讨RNA干扰下丘脑弓状核细胞因子信号转导抑制因子3（SOCS3）对饮食诱导大鼠肥胖的防治作用。方法利用慢病毒介导的RNA干扰技术建立大鼠下丘脑弓状核SOCS3基因沉默的动物模型，然后给予高脂饲料喂养8周处死，采用放射免疫法测定血清瘦素和胰岛素的含量。免疫组化及实时定量PCR方法检测大鼠下丘脑注射部位SOCS3的表达。结果干扰组大鼠下丘脑注射部位的SOCS3蛋白表达明显降低，SOCS3rnRNA表达量下调49％（P〈0．01），干扰组大鼠体重增长缓慢．血清瘦素[（8．18±2．10对10．85±2．23）ng／m1]、胰岛素[（18．89±4．88对26．78±6．01）mU／L]、血糖[（4．89±0．91对6．26±1．41）mmol／L]及甘油三酯[（0．47±0．10对0．62±0．16）mmol／L]水平均明显降低（P〈0．05或P〈0．01）。结论利用RNA干扰下调下丘脑弓状核SOCS3基因的表达能够抵抗高脂饮食诱导的肥胖、改善瘦素抵抗和相关的代谢紊乱。
- 白雪梅刘正娟王玉川张莉
- 关键词：慢病毒细胞因子信号转导抑制因子3下丘脑肥胖
