国家自然科学基金(21166007)
- 作品数：6 被引量：17H指数：4
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- 诱导子对海南粗榧悬浮细胞生长及三尖杉酯类碱合成的影响被引量：4
- 2015年
- 为提高海南粗榧悬浮细胞三尖杉酯类碱产量,本实验在悬浮培养第15天后,分别添加不同浓度的茉莉酸甲酯和水杨酸。通过测定细胞比生长速率、细胞活力、关键酶活力、产物合成量等,研究诱导子对海南粗榧悬浮细胞生长及三尖杉酯类碱合成的影响。结果表明:茉莉酸甲酯、水杨酸均可抑制细胞生长,增加细胞中苯丙氨酸解氨酶活力,促进酚类物质生成,但对6-磷酸葡萄糖脱氢酶活力无显著影响。在产物合成方面,100μmol/L茉莉酸甲酯和50μmol/L水杨酸效果最显著,三尖杉酯类碱总量依次为10.32和7.27 mg/L,分别是对照的3.40和2.26倍。因此,在海南粗榧悬浮培养第15天分别添加100μmol/L茉莉酸甲酯和50μmol/L水杨酸最有利于三尖杉酯类碱的合成。
- 龙晓娟李永成
- 关键词：海南粗榧茉莉酸甲酯水杨酸
- 海南粗榧外植体灭菌方法研究被引量：7
- 2014年
- 以海南粗榧(Cephalotaxus mannii Hk.f.)的枝条、叶为外植体进行愈伤组织诱导,采用升汞、次氯酸钠与臭氧为消毒剂,探讨不同灭菌方法对海南粗榧外植体污染和细胞活性的影响。结果表明,以升汞与臭氧复合处理的灭菌方法最佳,最佳灭菌条件为:75%酒精灭菌1 min,臭氧灭菌30 min,再用0.1%HgCl2溶液灭菌10 min。在此条件下,外植体污染率5%,愈伤组织诱导率95%,外植体细胞活力比对照提高38%。
- 王成韬钟秋平李永成
- 关键词：海南粗榧细胞活力污染率
- 植物细胞固定化条件对海南粗榧细胞生产三尖杉酯碱的影响被引量：2
- 2016年
- 为了研究海南粗榧细胞的固定化条件及其对细胞的生长和三尖杉酯碱合成的影响,本研究利用海藻酸钠凝胶包埋法对海南粗榧悬浮细胞进行固定化,并改变了其固定化条件,同时测定了生物量、PAL酶活性、凝胶球硬度、蔗糖含量和三尖杉酯碱产量等指标,结果显示：海南粗榧固定化细胞的生长周期为40 d,其中,在0~15 d其细胞生长停滞,在15~30 d其细胞生长缓慢,而30~40 d为缓慢衰亡期;海南粗榧细胞固定化培养的最佳产物提取时间为第15 d;包埋过程中Ca Cl_2的最适质量浓度为0.023 g/m L;鲜重细胞的最适接种量为10%.由此得出结论：海南粗榧细胞固定化培养抑制了细胞的生长,延长了细胞的生长周期,但缩短了细胞生产三尖杉酯碱的周期.
- 潘亚华蒋旋娴李永成
- 关键词：海南粗榧固定化三尖杉酯碱
- 海南粗榧细胞悬浮培养体系的建立被引量：5
- 2014年
- 以海南粗榧愈伤组织进行悬浮培养,考察了培养基、维生素、蔗糖浓度、p H值、接种量对海南粗榧细胞悬浮培养体系建立的影响,并利用HPLC技术检测海南粗榧悬浮细胞和培养基中生物碱的含量。结果表明：海南粗榧悬浮细胞系培养的最适条件：MS为基本液体培养基、添加蔗糖35 g/L＋VB1 10 mg/L、接种量6%、初始p H值5.5-7.0;发酵过程中每5 d调节p H值至6.0,有利于细胞的生长和产物的合成;细胞的生长呈“S”型曲线,细胞生长周期为30 d,产物含量在培养25 d时达到最大;细胞活力呈先急剧上升后缓慢下降的趋势。
- 陈林李永成
- 关键词：海南粗榧愈伤组织生物碱
- 海南粗榧愈伤组织增殖及褐变现象研究被引量：2
- 2013年
- 本文通过测定海南粗榧愈伤组织的生长速率、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)和多酚含量,探究外植体、培养基、抗褐变剂及激素对粗榧愈伤组织生长和褐变的影响。结果表明:叶片外植体诱导产生的愈伤组织褐变率比茎段外植体低;培养基添加0.5g·L-1聚乙烯吡咯烷酮(PVP)有良好的抗褐变效果。愈伤组织最佳增殖培养基为MS+萘乙酸(NAA)4mg·L-1+激动素(KT)0.1mg·L-1+蔗糖30g·L-1+卡拉胶6g·L-1+PVP0.5g·L-1。
- 王成韬钟秋平李永成
- 关键词：抗褐变海南粗榧愈伤组织增殖F
- L-丙氨酸对海南粗榧悬浮细胞合成三尖杉酯类碱的影响被引量：4
- 2017年
- 该研究在海南粗榧悬浮细胞培养的不同阶段(5、10、15、20 d),分别添加不同剂量的L-丙氨酸(10、30、50、100 mg·L^(-1)),测定细胞生长、细胞活力及产物含量,确定L-丙氨酸最佳的添加时间及添加剂量。结果表明:添加L-丙氨酸对细胞生长和细胞活力均有抑制作用;在海南粗榧悬浮培养第15天、添加30 mg·L^(-1)L-丙氨酸时,产物含量最高(4.853 6 mg·L^(-1)),是对照(2.853 8 mg·L^(-1))的1.7倍。同时,为了探讨添加L-丙氨酸对海南粗榧悬浮细胞糖代谢的影响,对培养基糖耗程度、细胞内糖酵解途径(glycolytic pathway,EMP途径)关键酶丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)活力、磷酸戊糖途径(hexose monophosphate pathway,HMP途径)关键酶6-磷酸葡萄糖脱氢酶(glucose 6-phosphate dehydrogenase,G6PDH)活力进行了测定,结果显示添加L-丙氨酸后,植物细胞培养液中总耗糖速度与对照相比无明显差异,丙酮酸激酶(PK)活力与对照(25.37 U·g^(-1))相比下降了29.10%,G6DPH活力是对照组(53.49 U·g^(-1))的1.33倍。以上结果说明,糖代谢途径中碳通量在一定程度上由EMP途径转向了HMP途径,三尖杉酯类碱合成的前体物PEP积累,E4P合成量增加,均有利于产物三尖杉酯类碱含量的增加。
- 蒋旋娴李永成
- 关键词：海南粗榧抑制剂L-丙氨酸
