徐州市科技计划项目(XF11C102)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：徐州医学院第二附属医院更多>>
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- RNA干扰沉默IGFIR表达对A549细胞放射增敏作用的研究
- 2015年
- 目的构建靶向胰岛素样生长因子1受体（IGFIR）-siRNA重组慢病毒表达载体，观察其对人肺腺癌A549细胞放疗增敏作用并探讨其机制。方法构建IGF1R—siRNA重组慢病毒，感染A549细胞，蛋白免疫印迹法检测IGFIR沉默效率；荧光实时定量PCR法及ELISA法分别检测缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）和Bad基因及蛋白表达情况。克隆形成实验检测放射增敏作用。结果IGFIR—siRNA重组慢病毒使A549细胞IGF1R蛋白沉默效率达70．53％；HIF-1α、VEGF和Bad基因及蛋白表达量均显著降低；A549细胞对放射治疗的敏感性增加，平均致死剂量由1．20Gy下降至0．94Gy，放射增敏比达1．28。结论沉默IGF1R对人肺腺癌A549细胞具有放疗增敏效应，其机制可能与HIF-1α、VEGF和Bad表达下调相关。
- 王海清贾晓民杜永亮赵杰徐永红施萍
- 关键词：胰岛素样生长因子1受体慢病毒载体放疗增敏RNA干扰A549细胞
- IGF1R-shRNA重组慢病毒的构建及对肺癌A549细胞增殖的影响被引量：4
- 2013年
- 目的构建IGF1R基因的shRNA慢病毒载体,转染A549细胞鉴定沉默效率,观察其对A549细胞增殖能力的影响。方法设计IGF1R干扰序列,与pGC-LV慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,包装shRNA慢病毒颗粒,感染A549细胞,应用RT-PCR和Western blot检测IGF1R干扰效果;细胞生长抑制实验、克隆形成实验及细胞周期检测评价其对A549细胞增殖的影响。结果成功构建了IGF1R-shRNA重组慢病毒并高效感染A549细胞,IGF1R mRNA及蛋白表达量分别下降74.51%,70.53%;细胞群体倍增时间显著延长,克隆形成能力显著降低,细胞周期阻滞于G0/G1期。结论本研究构建的重组慢病毒能显著抑制IGF1R表达,抑制A549细胞增殖。
- 杜永亮贾晓民李海泉赵杰王海清
- 关键词：慢病毒短发卡RNAIGF1R细胞增殖
- RNA干扰沉默IGF1R表达对A549细胞凋亡及化疗敏感性的观察被引量：4
- 2013年
- 目的:shRNA重组慢病毒感染A549细胞沉默IGF1R基因,观察其对A549细胞凋亡及紫杉醇化疗敏感性的影响。方法:构建IGF1R-shRNA-LV重组慢病毒,并以MOI=20感染A549细胞,评价感染效果;应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测IGF1R干扰效果;蛋白质印迹检测pro-Caspase-3、cleaved-Caspase-3、Fas和FasL蛋白相对表达量,Hoechst33258法检测细胞凋亡形态学变化;CCK-8法检测细胞对紫杉醇敏感性变化。结果:功构建IGF1R-shRNA真核表达质粒,并包装出重组慢病毒,对照组和实验组病毒滴度分别为(1.9E+9T)和(7.0E+8T)U/mL,A549感染效率>90%;空白对照组、阴性对照组和实验组比较,A549细胞IGF1R mRNA相对表达量分别为1.55±0.09、1.53±0.18和0.39±0.02,实验组显著下降,沉默效率为74.51%,t=11.145,P=0.000;IGF1R蛋白相对表达量分别为0.97±0.06、0.95±0.08和0.28±0.01,沉默效率为70.53%,t=33.147,P=0.000;pro-Caspase-3蛋白相对表达量分别为0.62±0.02、0.64±0.02和0.35±0.04,t=5.536,P=0.006;cleaved-Caspase-3蛋白相对表达量分别为0.07±0.01、0.08±0.01和0.16±0.02,表明Caspase-3被大量激活、分解,促进细胞凋亡,t=-3.438,P=0.025;Fas蛋白相对表达量分别为0.41±0.06、0.43±0.07和0.88±0.03,有利于启动死亡受体凋亡途径,t=-5.756,P=0.005;Fasl蛋白相对表达量分别为0.20±0.02、0.20±0.03和0.28±0.04,组间比较差异无统计学意义,t=-1.239,P=0.283。Hoechst33258染色见实验组细胞核深染增加,凋亡细胞显著增多。空白对照组、阴性对照组和实验组紫杉醇IC50分别为55.08、54.61和18.70ng/mL,紫杉醇敏感性显著增加。结论:构建的重组慢病毒能有效抑制IGF1R表达,诱导A549细胞凋亡,提高A549细胞对紫杉醇敏感性。
- 杜永亮赵杰贾晓民李海泉王海清徐俊马
- 关键词：慢病毒短发卡RNAA549细胞细胞凋亡
- 慢病毒介导的IGF1R基因干扰对A549细胞对紫杉醇敏感性的影响
- 2015年
- 目的探讨慢病毒介导的RNA干扰技术沉默人肺腺癌A549细胞胰岛素样生长因子1受体（IGF1R）表达，并观察其对紫杉醇化疗敏感性的影响。方法构建IGF1R重组慢病毒，感染A549细胞，建立稳定低表达IGF1R细胞株；应用RTPCR及蛋白免疫印迹法检测IGF1R沉默效率；CCK8比色法检测IGF1R沉默后A549细胞对紫杉醇敏感性的影响。构建裸鼠移植瘤模型，检测紫杉醇对低表达IGF1R的A549细胞移植瘤生长的抑制作用。结果成功构建IGF1R重组慢病毒，并建立了稳定低表达IGF1R的A549细胞株；紫杉醇对低表达IGF1R的A549细胞的半数抑制剂量由38．52μg／L降至16．27μg／L，敏感性提高2．37倍；低表达IGF1R的A549细胞移植瘤生长缓慢，与紫杉醇联合应用后，移植瘤生长显著抑制，体积抑瘤率达87．5％，重量抑瘤率达88．2％。结论慢病毒介导的IGF1R基因沉默能抑制人肺腺癌细胞增殖，并显著提高腺癌细胞对紫杉醇的敏感性。
- 王海清贾晓民赵杰李海泉杜永亮徐永红
- 关键词：胰岛素样生长因子1受体紫杉醇慢病毒
