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“重大新药创制”科技重大专项(2010ZX09401-305-14)

作品数：4 被引量：7H指数：2
相关作者：金宁一李霄齐延新王卓越王宇航更多>>
相关机构：军事医学科学院吉林大学深圳出入境检验检疫局更多>>
发文基金：“重大新药创制”科技重大专项转基因生物新品种培育专项吉林省重大科技攻关项目更多>>
相关领域：农业科学生物学理学医药卫生更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 2篇农业科学
  • 1篇生物学
  • 1篇医药卫生
  • 1篇理学

主题

  • 2篇双特异性
  • 2篇特异
  • 2篇特异性
  • 2篇肿瘤
  • 2篇重组腺病毒
  • 2篇腺病
  • 2篇腺病毒
  • 2篇抗肿瘤
  • 1篇凋亡
  • 1篇凋亡素
  • 1篇衣壳
  • 1篇衣壳蛋白
  • 1篇原核表达
  • 1篇启动子
  • 1篇前列腺
  • 1篇前列腺癌
  • 1篇前列腺癌细胞
  • 1篇戊型
  • 1篇戊型肝炎
  • 1篇戊型肝炎病毒

机构

  • 4篇军事医学科学...
  • 3篇吉林大学
  • 1篇吉林农业科技...
  • 1篇吉林大学中日...
  • 1篇吉林大学第一...
  • 1篇石河子大学
  • 1篇深圳出入境检...

作者

  • 4篇李霄
  • 4篇金宁一
  • 3篇齐延新
  • 2篇吴娜
  • 2篇王浩然
  • 2篇阚式绂
  • 2篇王宇航
  • 2篇王卓越
  • 1篇刘燕瑜
  • 1篇孙丹丹
  • 1篇刘立明
  • 1篇屈勇刚
  • 1篇刘广臣
  • 1篇杜寿文
  • 1篇张慕淳
  • 1篇王金辉
  • 1篇迟宝荣
  • 1篇赫东芸
  • 1篇季慧范
  • 1篇贾鹏

传媒

  • 2篇中国兽医学报
  • 1篇高等学校化学...
  • 1篇中华泌尿外科...

年份

  • 2篇2012
  • 2篇2011
共 4 条 记 录，以下是 1-4
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排序方式：
双特异性抗肿瘤重组腺病毒对前列腺癌细胞的抑制作用
2012年
目的探讨结合肿瘤特异性启动子hTERTp和特异性抑癌基因Apoptin的腺病毒Ad—hTERTp—Ela—Apoptin（Ad—VT）对前列腺癌PC-3细胞的抑制作用。方法于96孔板内制备前列腺癌PC一3单层细胞（5×10^3个／孔），分别用100个感染复数（multiplicityofinfection，MOI）、10MOI和1MOI的重组腺病毒Ad—VT、Ad—CMV—Apoptin（Ad—VP3）、Ad—hTERTp—E1a—EGFP（Ad．GT）和Ad—CMV．EGFP（Ad—EGFP）进行感染，以未感染孔为对照，每个剂量设3个复孔。采用96h噻唑盐（MTT）法，检测重组腺病毒埘PC-3细胞的抑制作用。于6孔板制备PC-3单层细胞（1×10^6个／孔），分别用100MOI的Ad—VT、Ad—VP3、Ad-GT和Ad—EGFP感染PC-3细胞，培养48h后，分别应用AO／EB染色法、DAPI染色法、AnnexinV检测法对PC-3细胞进行染色，在显微镜下观察细胞形态，分析Ad-VT对PC-3细胞的抑制方式；应用Caspase榆测法对PC-3细胞提取总蛋白，检测Caspase酶活性，分析Ad-VT对PC-3细胞的抑制方式。结果MTT法结果显示除Ad．EGFP外，Ad—VT、Ad—VP3和Ad—GT均不同程度地表现出对PC-3细胞的抑制作用，其中Ad—VT、Ad—GT的抑制作用强于Ad—VP3，差异有统计学意义（P〈0．05）；培养48、72、96h，随着MOI的增高，Ad—VT对PC-3细胞的抑制作用具有一定剂量效应关系趋势，感染剂量为100MOI时，Ad．VT对PC-3细胞的抑制作用具有一定时间效应关系趋势。通过AO／EB、DAPI、AnnexinV检测法和Caspase酶活性检测结果显示，Ad—VT可通过诱导PC-3细胞的捌亡抑制PC-3细胞的增殖。其中AO／EB染色可观测到经Ad—VT感染的PC-3细胞呈现橘红色；DAPI染色可观测到经Ad—VT感染的PC-3细胞细胞核呈现亮蓝色，且存在核内物质碎裂；AnnexinV检测法可观测到经Ad—VT感染的PC．3细胞出现磷脂膜外翻、细胞核皱缩、细胞膜通透性增加等凋亡特征；Caspase检测结果显示Ad—VT可明显上调Caspase2、3、6、8�
王金辉张慕淳李霄齐延新刘广臣孙丹丹金宁一
关键词：前列腺癌凋亡素重组腺病毒凋亡
缺失E3L基因减毒天坛株痘苗病毒的构建及筛选被引量：4
2011年
通过在E3L同源重组臂中插入含有增强型痘苗病毒早晚期启动子(pE/L)、增强型绿色荧光蛋白基因和同向Loxp(Locus of X-over P1)序列的表达盒构建穿梭质粒pTE-EGFP。利用pTE-EGFP和野生型天坛株痘苗病毒共转染仓鼠肾细胞(BHK-21),通过对绿色荧光蚀斑的10次筛选,构建缺失E3L基因并含有EGFP基因的重组痘苗病毒rTTVV-TE--EGFP+。利用rTTVV-TE--EGFP+和含有Cre(Cyclization recombination)重组酶基因的重组质粒pVAX1-Cre共转染BHK-21细胞,通过对无荧光蚀斑的10次筛选,构建无筛选标记的天坛株痘苗病毒减毒株rTTVV-TE--,并利用聚合酶链式反应(PCR)对其进行鉴定。鉴定结果显示,rTTVV-TE--中无E3L基因转录和EGFP基因表达。以上结果说明,所构建的痘苗病毒减毒株rTTVV-TE--完全缺失了E3L基因和外源筛选标记EGFP基因,且具有良好的遗传稳定性。
王宇航李霄王浩然阚式绂王卓越齐延新吴娜杜寿文金宁一
关键词：病毒载体
重组HEV衣壳蛋白截短体的表达及鉴定被引量：2
2012年
戊型肝炎(HE)是由戊型肝炎病毒(HEV)感染引起的肠道病毒性传染病.HEV是一种无囊膜的单股正链RNA病毒,其编码区由3个开放阅读框(ORF)组成,属戊型肝炎病毒科.HEV衣壳蛋白由ORF2编码.本研究根据编码HEV ORF2 aa382～aa674的核苷酸序列克隆了p293基因,并将其克隆入原核表达载体pET28a,利用大肠杆菌BL21(DE3)对HEV衣壳蛋白截短体(p293)进行了表达.SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,在优化的表达条件下(1 mmol/L IPTG,250 r/min,37℃,5 h),重组蛋白p293能够在大肠杆菌内有效表达,目的蛋白约占总蛋白的66.15%.TEM检测结果显示,原核表达的p293能够在体外形成约30～40 nm的病毒样颗粒.免疫印迹和免疫荧光检测结果表明,p293与HEV标准阳性血清具有良好的反应原性和反应特异性.实验结果表明,p293可应用于HEV宿主吸附和病毒装配研究,为HEV的预防与诊断研究奠定了基础.
李霄屈勇刚贾鹏刘立明季慧范赫东芸金宁一迟宝荣
关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白病毒样颗粒原核表达
表达Apoptin基因抗肿瘤双特异性重组腺病毒的构建及鉴定被引量：1
2011年
为研发一种安全、特异、高效的抗肿瘤基因治疗候选药物,本试验基于人端粒酶启动子(hTERTp)、人5型腺病毒复制必需基因(E1a)和特异性抑癌基因(Apoption),利用RAPAd.Ⅰ腺病毒载体系统,构建了一种具有肿瘤特异性杀伤和特异性复制能力的双特异性抗肿瘤重组腺病毒Ad-VT。并利用人肝癌细胞(HepG-2)、人肺癌细胞(A549)、人宫颈癌细胞(Hela)、人胚胎肺细胞(WI-38)和非洲绿猿肾细胞(Vero)对hTERTp的肿瘤特异性进行鉴定。结果显示,hTERTp可在HepG-2、A549和Hela等肿瘤细胞内特异性启动外源基因的表达,而在WI-38、Vero等正常细胞内不能启动相关基因表达。用RT-PCR及Western-blot等方法对Apoptin基因和E1a基因的转录和表达进行了鉴定。结果表明,Ad-VT能够有效表达Apoptin和E1a等外源基因。
王卓越李霄王浩然阚式绂王宇航齐延新吴娜刘燕瑜金宁一
关键词：APOPTINHTERT启动子基因治疗
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