中山市科技计划项目(20102A021)
- 作品数：4 被引量：17H指数：3
- 相关作者：张萃刘晓波李红枝梅俪凡黄超贤更多>>
- 相关机构：广东药学院中山市博爱医院广州医科大学更多>>
- 发文基金：中山市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 辛酸-硫酸铵法纯化细胞培养上清中单克隆抗体的条件优化被引量：7
- 2013年
- 常用的单克隆抗体（monoclonal antibody, mAb）纯化方法有辛酸硫酸铵沉淀法、 离子交换色谱法、 免疫亲和色谱法、 蛋白A亲和层析法等, 以此纯化小鼠IgG类或IgM类mAb。其中辛酸硫酸铵沉淀法简单易行, 无需复杂的仪器及设备, 实验中所用试剂均为普通试剂, 容易获得, 比其他纯化方法更值得推广。本文探讨辛酸-硫酸铵法纯化细胞培养上清中IgG类型的mAb优化条件, 目的在于更好的回收细胞培养上清中的mAb, 减少mAb制备过程中的大量抗体丢失, 为mAb的进一步开发利用提供实验条件。
- 刘若飞张萃葛如意陈玉琼刘晓波
- 关键词：MAB纯化正交实验
- 抗TRPC6多肽单克隆抗体的制备与鉴定被引量：7
- 2013年
- 目的制备抗TRPC6多肽单克降抗体,并对其免疫学和生物学特性进行鉴定。方法采用TRPC6多肽偶联血蓝蛋白(KLH)为抗原,免疫Balb/c小鼠,取血清效价高者脾细胞与Ag8.653骨髓瘤细胞进行融合。采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,以及测定单克隆抗体的特性、效价及其相对亲和力;采用单克隆抗体亚类检测试剂盒鉴定Ig亚型;并经有限稀释法克隆化培养获得杂交瘤细胞株;采用秋水仙素阻断法鉴定杂交瘤细胞株染色体。结果获得3株能稳定分泌抗TRPC6多肽的单克隆抗体,分别命名为A2、F11和H8;抗体Ig亚类均为IgG1型,染色体均在89±7条的范围内;相对亲和力结果 F11为6μg/ml,A2、H8为12.5μg/ml。结论抗TRPC6多肽单克隆抗体的成功制备,为TRPC6的免疫学检测方法的建立奠定基础。
- 张萃卢文菊梅俪凡黄超贤李红枝刘晓波
- 关键词：TRPC6多肽单克隆抗体杂交瘤
- 抗TRPC6多肽单克隆抗体的制备及其识别抗原表位分析被引量：3
- 2013年
- 目的:制备抗TRPC6多肽单克降抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法:采用TRPC6多肽偶联血蓝蛋白(KLH)为抗原,免疫小鼠后经细胞融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞;单克隆抗体亚类检测试剂盒鉴定Ig亚型;间接ELISA法鉴定该单克隆抗体的特性、效价及其相对亲和力;采用生物信息学进行抗原表位预测,并通过ELISA单抗相加试验分析单抗识别抗原位点的差异性。结果:获得3株能稳定分泌抗TRPC6多肽的单抗杂交瘤细胞株,分别命名为A2、F11和H8;抗体Ig亚类均为IgG1型;染色体鉴定符合杂交瘤细胞的特性;3株单抗相对亲和力比较F11较强,A2和H8接近;抗体识别位点分析结果表明A2与H8、A2与F11的相加指数分别大于50%,可能识别的是不同位点;而F11与H8的相加指数小于50%,可能识别的是同一位点。结论:抗TRPC6多肽单克隆抗体的成功制备及其识别抗原表位分析,为TRPC6蛋白的相关研究提供物质基础。
- 张萃卢文菊李红枝黄超贤王华妹丘世龙梅俪凡
- 关键词：TRPC6单克隆抗体抗原表位
- 检测瞬时受体电位通道6的ELISA双抗体夹心法的建立被引量：1
- 2013年
- 目的建立ELISA双抗夹心法以用于TRPC6蛋白的测定。方法采用mAb相加法和配对实验,选择最佳配对组合;并通过cELISA法测定mAb阻断率,以选亲和力较高的mAb进行HRP标记,最终建立ELISA双抗体夹心法以用于大鼠和小鼠脑组织TRPC6蛋白的测定。结果 mAb-A2与mAb-F11的AI>50%,配对较佳;mAb-F11亲和力较强,IC50为0.6μg/ml;HRP标记mAbF11的最低工作浓度为1∶1 600;建立ELISA双抗夹心法可检测到大鼠和小鼠脑组织TRPC6蛋白分别为(1.42±0.06)μg/ml和(0.88±0.04)μg/ml。检测线性范围0.625～10μg/ml,R2=0.992,组间变异系数小于10%。结论所建立的ELISA双抗夹心法灵敏高,特异性强,重复性好,可用于脑组织中TRPC6蛋白的测定。
- 张萃梅俪凡卢文菊刘晓波黄超贤李红枝
- 关键词：TRPC6MABELISA双抗体夹心法
