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RNA干涉技术及其在哺乳动物中的应用进展被引量：2: 2007年; RNA干涉(RNA interference,RNAi)作为一种有效的用于转录后基因沉默,从而抑制特定基因表达的技术,近年来在哺乳动物细胞中的研究已取得了长足发展,且在基因功能以及疾病治疗的研究中有着广阔的应用前景。研究表明,哺乳动物细胞中的RNAi作用方式与植物有所不同,笔者对哺乳动物RNAi技术的发展、作用机制及其在基因功能、基因治疗、转基因动物研究、药物开发等方面的应用做了综述。; 阮井玲周佳勃李冲刘娣; 关键词：RNAI 基因功能基因治疗

猪成纤维细胞冻存方法的研究被引量：2: 2005年; 试验以猪的成纤维细胞为研究对象,认为在-70℃情况下冻存至少7d不会影响其存活率(可达80%以上),且生长形态正常。同时利用血清饥饿法使成纤维细胞周期同步化,在-70℃冻存2d、4d和7d,细胞存活率可达92. 3%、87. 2%和83. 6%,甚至在该条件下冻存15d,细胞也能恢复正常的生长。; 梁洋刘娣孙兴参周佳勃岳顺利于玲珠; 关键词：冷冻复苏成纤维细胞核移植冻存方法存活率

7个猪种MyoD基因家族中3个基因外显子的SNPs检测分析被引量：17: 2005年; 本研究利用PCR SSCP技术,以7个猪种为研究对象,根据GenBank上猪的MyoG、MyoD和Myf5基因序列设计了17对引物,对此三基因的外显子进行了SNPs检测。检测结果:MyoG和MyoD两个基因均未检测到多态;在Myf5基因的3个外显子上都检测到了多态:第1外显子上有1个点突变G→C;第2外显子上有3个点突变C→A、A→G、G→A;第3外显子上,3387bp处有1个碱基A缺失,3417bp处有3个碱基T缺失,3443bp处有1个点突变T→C。Myf5基因的高度多态性,说明7个猪种含有丰富的遗传变异信息,具有很高的选择潜力。; 李景芬刘娣于浩; 关键词：SNPS PCR-SSCP

哺乳动物腔前卵泡体外培养及研究进展被引量：2: 2005年; 哺乳动物卵巢内的原始卵泡库是雌性生殖资源的储存库,但大部分卵泡在腔前阶段已退化闭锁了,这无疑是对这一资源的巨大浪费。因此,越来越多的学者致力于腔前卵泡的开发和利用,建立了一系列的培养体系,尤其在小鼠上做的比较成功,已经得到了少量后代。文章主要就卵泡的发生发育过程,腔前卵泡的分离方法,培养基的选择,不同直径腔前卵泡培养体系的建立,影响腔前卵泡发育的因素及研究进展进行了阐述,为进一步完善腔前卵泡培养体系,揭示其发育机理提供参考。; 梁洋刘娣孙兴参岳顺利周佳勃; 关键词：哺乳动物腔前卵泡

同源重组敲除MSTN基因的猪胎儿成纤维细胞的构建被引量：10: 2009年; 【目的】获得敲除肌肉生长抑制素(MSTN)基因的猪胎儿成纤维细胞。【方法】打靶载体的构建:以Neo为正筛选基因、HSV-tk为负筛选基因。在Neo的两侧分别插入同源长臂和同源短臂。同源长臂5382bp,包含MSTN基因的部分5′端,全部的exon1,intron1和exon2及大部分intron2;同源短臂844bp,包含部分exon3及3′端的部分序列。取35d胎龄的大白猪,用胰酶消化法,分离胎儿成纤维细胞并对其进行培养和建系。采用脂质体法将打靶载体导入胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞采用250μg·ml-1G418筛选7d,再用200μg·ml-1G418+2μmol·L-1GANC维持筛选。用RT-PCR法检测转染前转染后细胞MSTN基因表达量。【结果】成功构建了对猪MSTN基因部分intron2和exon3区域进行敲除的替代型打靶载体。共得到5个具有药物抗性的细胞克隆,经PCR检测,其中一个细胞克隆发生了正确的同源重组。转染后细胞MSTN基因表达量明显降低。【结论】获得了敲除MSTN基因的猪胎儿成纤维细胞。; 李景芬于浩袁野刘娣; 关键词：胎儿成纤维细胞基因打靶肌肉生长抑制素

猪胎儿成纤维细胞制作方法的改进及应用被引量：10: 2002年; 实验以猪胎儿为研究材料 ,对胎儿成纤维细胞的分离与培养方法进行改进 ,采用室温消化的方法制作猪胎儿成纤维细胞。结果表明 ,室温消化方法的细胞获得量 ,细胞活力和贴壁细胞的形态均优于常规的热消化方法 ,而且操作简单。; 孙兴参伊亚玲刘颖于玲珠刘娣; 关键词：胎儿成纤维细胞制作方法

6个地方鸡种Sox8基因编码区的PCR-SSCP分析: 2008年; 通过PCR-SSCP技术对6个地方鸡种的Sox8基因的编码区进行了单核苷酸多态性分析,在外显子3发现两个突变位点:即786 C→T和1 350 G→A。经统计分析和计算各种基因型频率及基因频率表明,在786 C→T的突变中,等位基因A在肉鸡中的频率比在蛋鸡中的频率高。因此,本试验得出趋势性结论:等位基因A的基因频率同脂肪性状呈正相关。; 夏彦玲刘娣陈国宏; 关键词：脂肪性状 PCR-SSCP

野猪、家猪及野家杂种猪Leptin基因2、3外显子的SNPs分析被引量：14: 2006年; Leptin是一种内分泌激素(167个氨基酸),主要在脂肪组织中表达,通过下丘脑对机体内能量的消耗和摄取起着重要的调节作用[1]。鉴于该文对野猪、家猪及野家杂种猪Leptin的2、3外显子进行了SNPs分析,并检测到了多态性。对纯合子片段进行克隆和测序,结果表明在编码区的214位碱基由T突变为C,编码的氨基酸没有发生改变;364位碱基由C突变为G,365位碱基由G突变为C,编码的Arg转变为Ala;426位由G突变为A,编码的氨基酸没有发生改变;451位插入碱基T,造成移码突变;462位由G突变为T。; 李景芬于浩刘娣; 关键词：LEPTIN

FSH对腔前卵泡生长发育的影响被引量：5: 2007年; 随着腔前卵泡体外培养体系的发展，对其影响因子的研究也逐渐深入，促性腺激素（FSH）在卵泡的生长和发育过程中发挥了重要的作用。本实验方法是以昆明小鼠为模型，机械分离并选择120～140μm的腔前卵泡，以添加10％血清和1％ITS的α-MEM为基础培养，分为正常添加FSH和不添加FSH组，以及在培养的0d、2d、4d、6d、8d添加FSH（100mIU/m1）组，探讨腔前卵泡的生长发育情况。结果表明：正常添加组其卵泡的存活率、出腔率、GVBD率和2-cell胚胎率（78．7％、55，0％、35．0％和7．5％）显著高于培养液中未添加FSH的结果（分别为13．7％、8．8％、6．3％和0）（P〈0．05）；6d之前添加FSH的培养组腔前卵泡能够正常生长和发育；2～4d添加FSH可能更利于卵母细胞的成熟，以及E2的产生依赖于FSH的存在。; 梁洋孙兴参胡小梅刘娣安铁洙; 关键词：FSH

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