国家自然科学基金(30871916)
- 作品数：18 被引量：36H指数：4
- 相关作者：薛良义叶秀丽杨斌孙爱飞汤泽源更多>>
- 相关机构：宁波大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划浙江省科技厅项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 大黄鱼肝细胞肿瘤相关抗原-127基因克隆及分子特征分析
- 2011年
- 在构建大黄鱼肌肉组织cDNA文库的基础上,克隆了肝细胞肿瘤相关抗原-127基因。克隆到的基因全长1 439bp,其中5'-UTR 124 bp,3'-UTR 640 bp,编码序列675 bp,编码224个氨基酸。生物信息学分析显示,大黄鱼HCA127基因存在多个功能位点,即N端糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和亮氨酸拉链结构位点。大黄鱼HCA127氨基酸序列具有较高的保守性,与斑马鱼、胡瓜鱼、大西洋鲑等多种鱼类的相似性在80%以上。在检测的9种组织中,肝细胞肿瘤相关抗原-127基因在肝、肾、肠、鳃、眼、脑组织中表达,其中在脑组织中表达最强,肝和鳃组织中次之,肾和眼组织中表达较微弱。
- 崔馨元薛良义
- 关键词：大黄鱼分子特征
- 大黄鱼肌肉生长抑制素基因原核表达及多克隆抗体的制备
- 2011年
- 肌肉生长抑制素抑制动物肌肉的生长发育.根据本实验室克隆的大黄鱼(Pseudosciaena cro-cea)肌肉生长抑制素(MSTN)基因编码序列设计引物,用RT-PCR扩增目的片段,构建MSTN-pET-28 a重组表达质粒,将其转化到大肠杆菌BL21上并用1.0 mmol/dm3IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳检测该目的蛋白大小约为44 kDa,与理论值大小符合.用0.25 mol/dm3KCl染色后从凝胶中切取该蛋白且回收.该回收蛋白与弗氏佐剂等量混合后注射ICR小鼠制备多克隆抗体,并用Westernblot检测该抗体.免疫印迹结果在44 kDa的位置上出现棕色条带,表明大黄鱼肌肉生长抑制素的多克隆抗体制备成功.这为今后对肌肉生长抑制素功能的研究奠定了基础.
- 董海阳叶秀丽薛良义Diallo Amadou
- 关键词：海洋生物学肌肉生长抑制素原核表达多克隆抗体免疫印迹
- Tol2转座子系统在转基因动物中的应用被引量：2
- 2011年
- Tol2是在青鳉鱼基因组中发现的一种具有自主性的转座子元件。它编码转座酶,催化Tol2转座子结构中5'端200 bp和3'端150 bp序列发生转座反应。Tol2的多种特性,如可携带大片段外源DNA、单拷贝整合效率高、转座子活性强等,使得以Tol2转座子系统为载体的转基因技术在多种生物中得到应用。综述了Tol2转座子系统的结构、特性以及近年来在多种动物转基因中的应用。
- 汤泽源薛良义
- 关键词：转座子转基因
- 大黄鱼KLF6基因分子克隆和特征分析被引量：2
- 2012年
- KLF6具有抗细胞增殖的特性,在抑制肿瘤细胞方面起着重要作用。在获得KLF6基因EST序列的基础上,克隆到了KLF6基因,全长1185 bp,其中5'端198 bp,3'端333 bp,开放阅读框654 bp,编码217个氨基酸。与KLF转录因子家族其它成员一样,大黄鱼KLF6的C-端含有3个连续的C2H2型锌指结构域。其氨基酸序列高度保守,与其它鱼类的同源性在90%以上。在检测的大黄鱼骨骼肌、肝脏、眼、脑、脾、心、鳃、肠和肾等9种组织中,KLF6都有不同程度的表达,其中肾、肝脏、鳃、脾脏和脑等组织中的表达量较高。KLF6表达范围的广泛性提示其在多种组织中参与细胞功能活动的调控。
- 贾鲁薛良义蔡灿徐镇
- 关键词：大黄鱼LIKEFACTOR克隆分子特征
- 水产动物代谢组学被引量：1
- 2011年
- 现阶段对水产动物代谢提取物的检测手段很多,包括核磁共振(NMR)技术、质谱(MS)技术、气质联用(GC-MS)技术、气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)和高效毛细管电泳(HPCE)等。色谱技术是最常用的技术,而核磁共振技术是新近发展起来的一门新技术。本文重点介绍了核磁共振的基本原理,以及基于核磁共振的水产动物代谢组学在国内外的研究进展。
- 胡铭炎薛良义
- 关键词：水产动物色谱技术核磁共振技术代谢组学
- 大黄鱼Flotillin-1基因分子特征分析被引量：1
- 2012年
- 浮舰蛋白-1(Flotillin-1)是属于SPFH家族的蛋白,是重要的脂筏标志性蛋白。在构建大黄鱼(Larimichthyscrocea)肌肉组织cDNA文库的基础上,克隆了Flotillin-1基因,并进一步扩增出内含子。克隆到的序列全长为2497bp,其中编码区1194 bp,编码397个氨基酸。生物信息学分析大黄鱼Flotillin-1有5类20个功能位点,存在2次跨膜结构,N端和C端都位于细胞膜内。大黄鱼Flotillin-1氨基酸序列具有非常高的保守性,与大西洋鲑和斑马鱼的同源性都在80%以上。在组织中的表达也非常广泛,其中在脾中的表达最强。
- 林天势薛良义张晓菊徐镇
- 关键词：大黄鱼克隆
- 大黄鱼肌肉组织cDNA全长文库的构建及EST分析被引量：4
- 2010年
- 以大黄鱼肌肉组织为材料,利用Creator Smart cDNA Library Construction Kit构建了大黄鱼肌肉组织的全长cDNA文库.文库质量分析表明:cDNA文库容量不低于1.68×106cfu/mm3,重组率达96%,插入片断的平均长度大于1 000bp.随机挑取512个cDNA克隆进行5’端测序,其中430条ESTs的长度大于100bp;并初步拼接得到了230个单基因簇(unigene),其中包括58个重叠群(contigs),172个单拷贝ESTs(singletons),冗余度为46.51%.经检索,35个ESTs在BLASTx上无明显的同源性(E值≤1.00×10-10),为新基因.195个ESTs与已报道的基因有较高的同源性;其中与能量相关基因的ESTs丰度最高,占总数的20.00%.蛋白质合成、细胞骨架和信号传导次之,比例分别为13.48%、12.17%、10.00%,其中包括高迁移率族蛋白B1、瘦素受体、β1-热激蛋白等.这些EST数据为进一步筛选和克隆大黄鱼肌肉特异性表达基因提供了平台.
- 黄伟薛良义李婷杨斌
- 关键词：海洋生物学大黄鱼肌肉组织
- 大黄鱼肌肉生长抑制素-1前肽原核表达、多克隆抗体制备和功能验证被引量：2
- 2014年
- 肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)在动物肌肉的生长和发育过程中起着重要作用。该研究通过RT-PCR从大黄鱼(Larimichthys crocea)肌肉组织中克隆肌肉生长抑制素-1前肽基因(MSTN-1pros),构建了表达大黄鱼生长抑制素前肽的重组质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,获得了大黄鱼MSTN-1pros融合蛋白。用分离的重组蛋白免疫大白兔,制备了抗大黄鱼MSTN-1pros的多克隆抗体。经蛋白免疫印迹法检测,确定获得的抗体具有较高的特异性。通过对大黄鱼幼鱼的注射实验,发现注射过MSTN-1pros抗体的大黄鱼增重率比对照组降低了20.71%(P<0.05),证明MSTN前肽抗体对大黄鱼的生长具有抑制作用。实验结果表明,MSTN前肽蛋白可以用于养殖鱼类的生长调控。
- 应俊薛良义
- 关键词：大黄鱼原核表达多克隆抗体肌肉生长
- 大黄鱼肌肉生长抑制素基因外显子Ⅱ遗传多态性分析被引量：5
- 2010年
- 肌肉生长抑制素是控制动物骨骼肌生长发育的重要细胞因子,采用PCR-SSCP和测序方法分析了150尾大黄鱼样本肌肉生长抑制素基因(myostatin)外显子Ⅱ的单核苷酸多态性,结果发现,外显子Ⅱ中有10个多态位点,分别是29、131、206、261、231、243、265、273、297和300位。其中131位点T→A突变引起相应的氨基酸由L→Q,265位点T→C突变引起相应氨基酸由C→R,261位点A→G突变引起相应氨基酸由S→G,231位点的T→C突变引起相应氨基酸由W→S,273位点的C→T突变引起相应的氨基酸由R→W,297位点的A→G突变引起相应氨基酸由I→V,243位点的G→A突变引起相应氨基酸由D→N,300位点的G→A突变引起相应氨基酸由E→K。29位点A→G和206位点C→A均属于同义突变。存在6种基因型,他们的基因频率分别是0.57、0.23、0.10、0.04、0.02、0.04,该基因位点的杂合度为0.33。
- 杨斌薛良义叶秀丽董小敬
- 关键词：大黄鱼肌肉生长抑制素基因单链构象多态性
- 大黄鱼白细胞介素8基因克隆及特征分析被引量：1
- 2013年
- 白细胞介素8是一种CXC型趋化性细胞因子,在免疫反应中起着非常重要的作用。本文在构建大黄鱼肌肉组织cDNA文库的基础上,克隆了白细胞介素8基因。克隆到的白细胞介素8全长为2 582bp,基因组包含106bp的5'端非编码区,52bp的外显子I,168bp的内含子I,133bp的外显子II,149bp的内含子II,87bp的外显子Ⅲ,682bp的内含子Ⅲ,13bp的外显子IV和1 192bp的3'端非编码区,编码序列285bp,编码94个氨基酸。氨基酸序列具有趋化性因子CXC家族的结构特征,在进化上高度保守,与鲈鱼的同源性在90%以上。在检测的大黄鱼的10种组织中,表达量较高的为肾、肝、肠和脾,脑、心和肌肉中表达量较低。
- 王亚芳薛良义
- 关键词：大黄鱼白细胞介素8基因结构
