中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(ITBBZX2008-2-3)
- 作品数：10 被引量：98H指数：6
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- 香蕉枯萎病生防细菌的筛选、鉴定及其抑菌作用被引量：14
- 2010年
- 采用平板对峙法,从香蕉根部土样中分离到1株枯萎病拮抗芽孢杆菌XY-10。根据形态特征及16S rDNA分析将其鉴定为多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa。拮抗试验表明菌株XY-10不同浓度的发酵滤液均可抑制病原菌孢子萌发和生长,当发酵滤液浓度分别为10%、30%和50%时,其在高度抑制水平上的抑制率分别为7%、23%和40%。经发酵滤液处理,病原菌菌丝末端膨大成球状、菌丝破裂、消解,菌丝体分枝增多。
- 孙建波王宇光赵平娟彭明
- 关键词：香蕉枯萎病菌多粘类芽孢杆菌拮抗
- 一株拮抗香蕉枯萎病菌的链霉菌分离和鉴定被引量：9
- 2011年
- 从海南温泉中分离到1株对香蕉枯萎病病原菌4号小种有强拮抗作用的链霉菌菌株HW1,对该菌株进行了形态特征、培养特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析。并对该菌株和香蕉枯萎病病原菌4号小种在土壤中进行了不同温度下的共培养试验。结果表明,其在PDA培养基上,内生菌丝无横隔、不断裂;孢子圆形,簇聚在气生菌丝上。在PDA培养基上,菌落生长开始为白色,培养成熟后,气丝逐渐由白色变灰,最后因为产生孢子变为褐色,并可产黄色可溶色素。以16S rDNA序列为基础构建了菌株HW1的系统发育树,其与模式链霉菌株的16S rDNA序列的同源性为99%。初步将该菌株鉴定为Streptomyces costaricanus。HW1菌株和香蕉枯萎病病原菌4号小种在土壤中的共培养试验表明,HW1菌株在45℃温度的生长环境中,表现出对香蕉枯萎病病原菌较好的抗性。
- 卢娟夏启玉孙建波卢雪华王宇光张昕
- 关键词：香蕉枯萎病共培养
- 香蕉内生拮抗细菌KKWB-5的几丁质酶在大肠杆菌中的表达纯化与复性研究
- 2013年
- 将香蕉内生拮抗细菌KKWB-5的几丁质酶在大肠杆菌中的表达,旨在检测该酶对香蕉枯萎病病原菌4号小种的抗性。PCR扩增该基因连入大肠杆菌表达载体pET22b,导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组菌株,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达,对目的蛋白进行纯化,并将纯化后的目的蛋白复性,对复性产物进行水解几丁质活性和拮抗香蕉枯萎病活性的分析。SDS-PAGE分析表明目的蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式大量表达,经变性Ni2+柱纯化得到了高纯度的重组蛋白,表达量达293 mg/L;稀释和透析2种复性方法中,透析复性法的目的蛋白得率较高,为84.6%。复性后的目的蛋白具有水解几丁质的活性,同时对香蕉枯萎病病原菌也具有一定的抗性,但抗性较弱。该几丁质酶在大肠杆菌中得到高效表达,且复性后的几丁质酶对香蕉枯萎病病原菌4号小种有一定的抑制作用,该酶对KKWB-5菌株拮抗香蕉枯萎病菌的能力有一定的贡献。
- 夏启玉顾文亮卢娟张欣卢雪花王宇光
- 关键词：拮抗细菌几丁质酶表达纯化复性
- 从拮抗枯萎病的香蕉植株中分离内生细菌的研究初报被引量：7
- 2010年
- 香蕉枯萎病已成为香蕉产业的毁灭性病害,近年在中国的香蕉主要区迅速蔓延,目前还未找到有效的解决措施。在海南枯萎病严重发病多年的香蕉园中,发现在严重感病致死的植株包围中,存在着能正常挂果并成熟的植株。由于它们在品种上的相同性,因此从品种的差异上难以解释该现象。分离了其中的内生微生物,发现其中的内生微生物主要以细菌为主,一部分细菌能分泌几丁质酶,对病原菌有一定的拮抗性,尤其在香蕉杆浸出汁培养基中对病原菌的生长有一定抑制作用。这为香蕉枯萎病的生物防治提供了一条较好的思路。
- 王宇光孙建波夏启玉罗冠勇卢雪华张欣
- 关键词：香蕉枯萎病几丁质酶
- 拮抗菌XB16在香蕉体内的定殖及对抗病相关酶活性的影响被引量：28
- 2010年
- XB16(Bacillus subtilis)是分离自香蕉根部组织的芽孢杆菌,该菌株对香蕉枯萎病有显著的拮抗作用。为进一步研究XB16在香蕉体内的定殖情况及对抗病相关酶活性的影响,通过浓度梯度诱导法,获得在含有300μg/mL利福平的NA培养基上稳定生长且对病原菌拮抗能力保持不变的XB16突变株。在温室条件下采用3种不同的接种方法,研究XB16在香蕉体内的定殖动态。结果表明,采用伤根淋菌液法和灌根法接种,XB16均能在香蕉体内定殖和传导,显示出该菌株在香蕉体内有较好的定殖能力。两种接种方法中,定殖菌数量在香蕉各组织中的消长动态均表现为先增长后缓慢下降;但是采用喷雾法接种XB16后在香蕉各组织中没有检测到标记菌,说明该接种方法不能使XB16在香蕉体内定殖。灌根法接种XB16后取香蕉假茎组织测定了香蕉体内抗病相关酶的活性。结果表明,拮抗菌株处理后过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)均比接种病原菌和清水对照明显提高,PPO和POD酶活最高峰分别出现在接种后第5天和第7天。两种酶在接种后的第15天仍保持较高活性,推测诱导抗性是XB16菌株的防病机制之一。
- 孙建波王宇光赵平娟孙海彦彭明
- 关键词：香蕉拮抗菌定殖酶活性
- 一株拮抗香蕉枯萎病的青霉菌的分离及鉴定被引量：4
- 2011年
- 旨在从海南土壤中分离对香蕉枯萎病病原菌4号小种(FOC4)有较强拮抗作用的微生物。采用对峙实验法从海南土壤中分离到一株对FOC4有较强拮抗作用的菌株QW1,对该菌株进行了显微特征、菌落特征以及26SrDNA序列分析。此外,将该菌株与FOC4在土壤中进行了共培养实验研究。结果表明,该菌株在土豆葡萄糖培养基上生长的内生菌丝无横隔膜;孢子梗顶端膨大成帚状;单个分生孢子为椭圆形,蓝色;产有性孢子。菌落生长开始为白色,培养成熟后,气丝逐渐因产生孢子由白色变蓝色。以26SrDNA序列为基础构建了相关种属在内的系统发育树,其与青霉菌株的26SrDNA序列的同源性大于为99%。将该菌株鉴定为青霉菌。共培养实验表明,该菌株在土壤中有较强的生长力,且能有效抑制病原菌的生长。青霉菌QW1对FOC4有较强的拮抗作用,并且与FOC4在土壤中共培养的实验中也表现出较强的抑制FOC4的生长作用。
- 王宇光卢娟孙建波夏启玉卢雪华张欣
- 关键词：青霉菌香蕉枯萎病共培养
- 一株拮抗香蕉枯萎病的内生细菌的分离及其几丁质酶基因信号肽的分泌活性分析被引量：10
- 2010年
- 目的:旨在分离并选择一株香蕉内生细菌作为内生基因工程生防菌,并克隆其几丁质酶基因的信号肽序列。方法:从香蕉植株杆下部分离并选择了一株拮抗香蕉枯萎病且具有分泌几丁质酶能力的内生细菌,对该菌株进行了形态观察、生理生化测定和16SrDNA序列分析,克隆了其几丁质酶基因的编码序列并预测了其信号肽,构建了含有信号肽和不含信号肽的几丁质酶的表达菌株BL-chi1和BL-chi2。结果:结合形态观察、生理生化特征和16SrDNA序列比对分析确定该菌株为Klebsiella属,将该菌株命名为KKWB-5;BL-chi1和BL-chi2经IPTG诱导后,均表达了与预期蛋白大小一致的蛋白,同时BL-chi1诱导后的培养基上清中出现一条约45kDa的条带,而BL-chi2和空载体的BL-pET22b诱导后的培养基上清中均无此条带;几丁质水解试验发现,BL-chi1诱导后的培养基上清中的蛋白经浓缩和纯化后都能在几丁质平板上形成透明水解圈。结论:该几丁质酶的信号肽能被BL21(DE3)所识别,将几丁质酶分泌到培养基中,并且分泌的几丁质酶具有水解几丁质的生物学活性。内生菌KKWB-5的分离及其几丁质酶分泌信号肽序列的克隆为进一步构建内生工程菌来防治香蕉枯萎病打下了基础。
- 夏启玉王宇光孙建波卢雪花顾文亮
- 关键词：香蕉枯萎病内生细菌克雷伯氏菌几丁质酶信号肽分泌活性
- 拮抗香蕉枯萎病菌的解淀粉芽孢杆菌LX1菌株的鉴定及其抗菌蛋白基因的克隆被引量：22
- 2013年
- 收集海南不同盐碱地的土样进行拮抗香蕉枯萎病菌的微生物分离,对具有较强抑菌作用的菌株进行形态特征、生理生化和分子鉴定,并克隆其抗菌蛋白基因。结果分离到1株具有较强抑制香蕉枯萎病菌能力的细菌LX1,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。抑菌实验发现LX1菌株的发酵上清液中粗蛋白有一定的抑菌作用,经过Sephacryl S-200HR柱层析、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析分离纯化了其中抑菌作用最强的抗菌蛋白。质谱鉴定结果表明,抗菌蛋白与B.amyloliquefaciens FZB42内切葡聚糖酶同源性最高。根据质谱结果克隆了该抗菌蛋白的编码基因,该基因的核苷酸和氨基酸序列与B.amyloliquefaciens FZB42的内切葡聚糖酶的核苷酸和氨基酸序列同源性分别达99%和100%。拮抗香蕉枯萎病菌的芽孢杆菌LX1可作为潜在的防治香蕉枯萎病的的生防制剂,其抗菌蛋白基因也可通过遗传工程应用于香蕉枯萎病的防治。
- 卢娟夏启玉顾文亮孙建波卢雪花张欣王宇光
- 关键词：香蕉枯萎病解淀粉芽孢杆菌抗菌蛋白基因克隆
- 香蕉内生拮抗细菌KKWB-10的分离鉴定及其内生性证明被引量：6
- 2012年
- 从香蕉体内分离拮抗香蕉枯萎病菌的内生细菌,旨在应用于香蕉枯萎病的生物防治。从健康香蕉植株的球茎分离到多株细菌,对其进行了拮抗香蕉枯萎病菌4号小种的实验,选择其中1株拮抗性较强的菌株KKWB-10进行了形态特征、生理生化测定、16SrDNA序列分析,并通过浸根法将标记了绿色荧光蛋白GFP的该菌(K-pUCK7-1'GT菌)回接无菌的香蕉组培苗,培养10天后,制备香蕉苗的根和茎的手工切片于激光共聚焦显微镜下观察。抑菌实验结果表明,该菌株对香蕉枯萎病菌4号生理小种有较强的抑制作用。通过形态学观察、生理生化指标测定、16SrDNA序列同源性分析,将该菌株初步鉴定为阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)。激光共聚焦显微镜观察发现经K-pUCK7-1'GT菌液处理的香蕉组培苗的根和茎的切片中均发现绿色荧光,而未处理的对照组的香蕉苗却没有发现绿色的荧光,表明该菌株能定殖于香蕉的根和茎内。该菌株可直接作为生防菌剂,也可用作外源抗病基因在香蕉植株体内表达的载体,在香蕉枯萎病菌的生物防治中具有一定的潜在价值。
- 王宇光顾文亮张欣卢雪花夏启玉
- 关键词：香蕉枯萎病内生细菌阴沟肠杆菌
- 香蕉内生克雷伯氏菌KKWB-5强启动子片段的分离及鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的:旨在获得香蕉内生克雷伯氏菌KKWB-5的强启动子片段,以应用于香蕉内生工程菌的构建。方法:利用以kanr基因为报告基因的启动子探针载体pUCK在大肠杆菌Top10中克隆KKWB-5基因组DNA的启动子片段;将筛选到的高抗Kan的质粒导入KKWB-5,分别于LB和香蕉杆浸汁培养基(BSM)平板上检测它们的抗Kan水平;选择在BSM上抗Kan水平最高的片段15,检测该片段的基因间隔区15P的启动子活性,最后以gfp为报告基因来验证片段15P的启动子活性。结果:有7个抗Kan水平在2500μg/ml以上的Top10转化子;这7个质粒在导入KKWB-5后,它们在LB平板上的抗Kan水平有不同程度的增加,但在BSM培养基上则大为减弱;片段15P具有启动kanr基因的活性,且与原片段15的抗Kan水平相同;重组质粒pUCK-6-15Pgfp,以Top10和KKWB-5为宿主菌,在LB培养基上培养时,在荧光显微镜下均能发出绿色荧光;以KKWB-5为宿主菌,在BSM培养基上培养时,在荧光显微镜下也能发出绿色荧光。结论:片段15不仅在Top10中具有较强的启动子活性,而且在其供体菌KKWB-5中具有更强的启动子活性,其基因间隔区15P为主要的启动子区域,在BSM培养基上也具有较好的启动子活性,该启动子片段15P可以应用于KKWB-5内生工程菌的构建。
- 夏启玉孙建波顾文亮卢娟卢雪花王宇光张欣
- 关键词：肺炎克雷伯氏菌启动子GFP
