南京军区医学科技创新课题(072045)
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
- 相关作者：唐家琪潘秀珍韩明月王长军邵珠卿更多>>
- 相关机构：南京师范大学中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京军区疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：南京军区医学科技创新课题南京军区卫生专业人才培养“122工程”江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 猪链球菌2型组氨酸三聚体蛋白原核表达被引量：4
- 2009年
- 目的鉴定猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2,S.suis2)组氨酸三聚体蛋白(Histidine Triad Pro-tein,HTP),并研究该蛋白的免疫原性,为研究S.suis2保护性疫苗奠定实验基础。方法通过与相关家族蛋白进行同源性比较,在猪链球菌Z型05ZYH33全基因组序列中发现了编码HTP的基因。设计合成引物,进行PCR扩增,并将目的片段克隆到表达载体pET28a,表达并纯化出目的蛋白,通过蛋白印迹(Western blot)检测其免疫原性。结果PCR扩增出约2.7kb的片段,并成功表达分子量在110KD左右的目的蛋白。通过His-Tag亲和层析,获得纯度较高的融合蛋白。Western blot检测结果表明,该表达产物具有免疫原性。结论S.suis2中国强毒株中存在HTP,并具有良好免疫原性,可作为S.suis2免疫保护性疫苗候选分子。
- 邵珠卿韩明月葛俊超王长军潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型克隆
- 组氨酸三聚体蛋白在2型猪链球菌的定位被引量：3
- 2009年
- 目的研究组氨酸三聚体蛋白(histidine triad protein,Htp)在2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,S.suis 2)05ZYH33中的定位,以及sortase A(srtA)基因缺失对该蛋白表达的影响。方法通过生物软件分析Htp氨基酸序列的分子特征;以纯化的Htp重组蛋白为免疫原,免疫新西兰兔,获得兔抗Htp抗血清;利用western blotting和ELISA检测该抗体的特异性和效价;以抗Htp抗体为工具通过流式细胞术验证Htp在菌体表面的定位,并比较05ZYH33和srtA基因敲除突变株△srtA菌体表面Htp的表达量。结果生物软件预测发现Htp存在信号肽和跨膜序列,具备表面蛋白的特征;流式细胞分析发现Htp定位于S.suis 2表面;△srtA菌体表面Htp的量明显少于野生型菌株。结论本研究明确了Htp在S.suis 2菌体表面的定位并发现srtA基因敲除后细菌表面的Htp有所减少,为进一步研究Htp在猪链球菌致病过程中发挥的功能及其调控机制奠定了基础。
- 邵珠卿潘秀珍韩明月李先富秦跃红王长军唐家琪
- 关键词：流式细胞术SORTASE
- 2型猪链球菌中国强毒株znuA基因的原核表达及免疫学活性分析被引量：7
- 2010年
- 目的克隆2型猪链球菌高亲和力锌吸收蛋白(High-affinity zinc uptake system protein,ZnuA)编码基因并进行原核表达,研究ZnuA蛋白的免疫学活性。方法采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因znuA,构建重组表达质粒pET32a::znuA,转化E.coli BL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;His亲和层析柱纯化重组蛋白;Western blot检测ZnuA蛋白的免疫原性;重组蛋白免疫新西兰兔后收集多抗血清,间接ELISA检测多抗血清效价。结果构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,His亲和层析柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;Western blot结果表明ZnuA蛋白具有良好的免疫原性;重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的多抗血清。结论在原核系统中成功地表达了znuA基因编码的蛋白,且ZnuA重组蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研究znuA基因在猪链球菌致病过程中的作用以及猪链球菌疫苗的开发奠定了基础。
- 韩明月潘秀珍邵珠卿李先富刘文静郑峰王长军唐家琪
- 关键词：猪链球菌
- 2型猪链球菌中国强毒株溶血素样蛋白基因的原核表达及其抗血清制备被引量：2
- 2009年
- 目的克隆2型猪链球菌溶血素样蛋白(Hemolysin-like protein,HLP)编码基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并制备相应的多克隆抗体。方法采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因hlp,构建重组表达质粒pET32a::hlp,转化E.coliBL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;His亲和层析柱纯化重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot检测多抗血清。结果构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,His亲和层析柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的抗血清。结论在原核系统中成功地表达了hlp基因编码的蛋白,并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究hlp基因的功能奠定了基础。
- 韩明月潘秀珍邵珠卿葛俊超王长军唐家琪
- 关键词：猪链球菌克隆
