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山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(2010BSB14050): 作品数：13 被引量：71H指数：4; 相关作者：张宝刚刘雨清孙磊李小龙姬静更多>>; 相关机构：潍坊医学院潍坊医学院附属医院邹城市人民医院更多>>; 发文基金：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金国家自然科学基金山东省高等学校科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

NUAK1增加乳腺癌细胞的趋化和粘附能力被引量：1: 2014年; 本课题组先前已证明NUAK1/ARK5可通过影响F-actin的聚合从而促进乳腺癌细胞的侵袭和转移.但是NUAK1是否还通过其它机制影响乳腺癌的侵袭和转移尚有待于探讨.本文证明NUAK1还可以影响乳腺癌细胞趋化、粘附能力从而在乳腺癌细胞侵袭转移中起重要作用.应用化学合成的小RNA干扰质粒转染到乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,用免疫印迹技术检测NUAK1蛋白的表达情况.结果显示,在敲除NUAK1的细胞(siNUAK1/MDA231)中,NUAK1蛋白表达水平明显降低;趋化运动实验结果显示,siNUAK1/MDA231细胞的趋化运动能力比未处理组(Scr/MDA231)细胞明显降低;细胞粘附实验结果显示,EGF刺激5 min、15 min后,siNUAK1/MDA231细胞比Scr/MDA231细胞粘附细胞数量均明显减少;免疫印迹技术检测integrinβ1磷酸化验证NUAK1影响乳腺癌细胞粘附的机制.结果显示,siNUAK1/MDA231细胞内integrinβ1磷酸化比Scr/MDA231细胞不同程度降低.上述结果表明,NUAK1通过磷酸化integrinβ1促进乳腺癌细胞与纤维粘连蛋白的粘附,从而促进乳腺癌的侵袭和转移.; 李洪利尹崇高; 关键词：乳腺癌整合素Β1 粘附

乳腺癌中mTOR、CCR7的表达及与淋巴结转移的关系被引量：4: 2013年; 目的探讨乳腺浸润性导管癌中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)与趋化因子受体7(chemokine receptor 7,CCR7)的表达以及与乳腺癌侵袭、转移之间的关系。方法采用免疫组化MaxVision法检测105例乳腺浸润性导管癌、55例转移淋巴结及40例正常乳腺组织中mTOR和CCR7的表达,并分析mTOR和CCR7的表达与乳腺癌侵袭和淋巴结转移的关系以及二者之间的相关性。结果 mTOR在乳腺浸润性导管癌、转移淋巴结及正常乳腺组织中的阳性率分别为68%(71/105)、93%(51/55)、25%(10/40),差异有统计学意义(P<0.05);CCR7在乳腺浸润性导管癌、转移淋巴结及正常乳腺组织中的阳性率分别为74%(78/105)、94%(52/55)、28%(11/40),差异有统计学意义(P<0.05)。在乳腺癌中,mTOR和CCR7的表达呈正相关(rs=0.203,P<0.05)。mTOR和CCR7的高表达均与淋巴结转移有关(P<0.05)。结论mTOR和CCR7的异常高表达可能与乳腺癌的侵袭、转移有关,且检测二者的表达可作为判断乳腺癌转移及预后的预测指标。; 刘清华孙磊李媛媛李小龙王竹青刘雨清; 关键词：乳腺肿瘤浸润性导管癌 MTOR CCR7

mTOR和CCR7与乳腺癌侵袭转移的关系: 2013年; 目的:探讨乳腺浸润性导管癌组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)与趋化因子受体7(chemokine receptor 7,CCR7)蛋白的表达,以及二者与乳腺癌侵袭、转移之间的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测65例乳腺浸润性导管癌及32例正常乳腺组织中mTOR和CCR7的表达情况,并分析二者之间的相关性及其与各临床病理特征之间的关系。结果:mTOR和CCR7蛋白在乳腺浸润性导管癌中的阳性表达率(mTOR为68%,CCR7为74%)高于癌旁正常乳腺组织中的阳性表达率(mTOR为25%,CCR7为28%),差异有统计学意义(P<0.01)。mTOR与CCR7的表达呈正相关(r=0.485,P<0.05)。mTOR和CCR7的高表达均与淋巴结转移、临床恶性肿瘤分期有关(均P<0.05),而与年龄、雌激素受体、孕激素受体无关(均P>0.05)。结论:mTOR和CCR7的异常高表达可能与乳腺癌的侵袭、转移有关,且检测二者的表达可作为判断乳腺癌转移的预测指标。; 刘清华李媛媛徐滨王竹青刘雨清; 关键词：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白趋化因子受体7 乳腺浸润性导管癌免疫组织化学

CCL18通过与Nir1结合促进胶质瘤细胞侵袭的研究被引量：2: 2015年; 背景与目的:Nir1是CCL18的跨膜受体,CCL18能与之特异性结合而促进乳腺癌细胞的侵袭与转移,但其在胶质瘤细胞中的作用尚不清楚。该文旨探讨Nir1在胶质瘤侵袭中的作用及分子机制。方法:应用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Nir1在不同胶质瘤细胞系中的表达;利用siRNA技术抑制U251细胞中Nir1的表达;采用Western blot检测转染后Nir1蛋白的表达和转染前后U251细胞中Akt磷酸化的情况;使用体外侵袭实验检测转染后细胞的运动和侵袭能力;采用F-actin聚合实验检测F-actin的聚合能力。结果:Nir1在各胶质瘤细胞中均呈高表达;小RNA干扰技术沉默Nir1基因后,U251细胞中Nir1的蛋白表达量明显下降,侵袭并穿透Matrigel胶的细胞数目明显比对照组少(P=0.00);在CCL18刺激后细胞内的F-actin聚合量比对照组减少;Akt磷酸化试验结果显示,对照组细胞在CCL18的刺激下Akt更易发生磷酸化,实验组细胞无论是否存在CCL18,Akt磷酸化都受到抑制。结论:在胶质瘤细胞中存在Nir1蛋白高表达,通过与细胞膜上CCL18特异性结合来调节胶质瘤细胞的F-actin聚合和Akt的磷酸化进而调控胶质瘤细胞的运动和侵袭能力。; 陈萍萍田红艳李洪利史立宏任甜甜翟丽敏张宝刚; 关键词：胶质瘤 AKT SIRNA

ARK5,MMP-14在胃癌中的表达及其对临床病理特征的影响: 2011年; 目的观察腺苷酸活化蛋白激酶5（ARK5）,基质金属蛋白酶14（MMP-14）在胃癌原发灶中的表达,探讨两者之间的相关性及其与临床病理特征的关系.方法免疫组织化学方法检测ARK5,MMP-14在81例胃癌手术标本和20例正常胃组织中的表达,比较二者在两种组织中的表达差异.结果 ARK5,MMP-14在胃癌原发灶中的阳性表达率分别是74.07％,64.20％,均明显高于在正常胃组织中的表达（P＜0.05）.ARK5,MMP-14的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期相关（P均＜0.05）.ARK5的表达与MMP-14的表达呈正相关（P＜0.05）.结论 ARK5和MMP-14异常表达可能共同参与了胃癌的发生、发展过程,促进了胃癌的侵袭和转移,ARK5和MMP-14有望成为检测胃癌恶性程度的参考指标.; 崔若凡张宝刚姬静郭文君; 关键词：胃癌

ARK5与乳腺癌侵袭转移关系的研究被引量：15: 2012年; 目的探讨ARK5在乳腺癌侵袭和转移中的意义。方法采用免疫组化SP法检测58例乳腺癌组织和15例癌旁乳腺组织中MMP-2、MMP-9及ARK5表达。应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染MDA-MB-435细胞株,采用Western blot法检测瞬时转染后ARK5蛋白表达情况。通过体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化。ARK5下降后,再次进行Western blot法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果乳腺癌组织中MMP-2、MMP-9和ARK5免疫组化阳性结果之间存在正相关性。转染后的细胞株命名:转染ARK5质粒的MDA-MB-435细胞称之为SiARK5/MDA-MB-435,转染对照质粒的MDA-MB-435细胞称之为Scr/MDA-MB-435。转染72 h后,与Scr/MDA-MB-435细胞相比,SiARK5/MDA-MB-435细胞的ARK5蛋白表达水平降低。ARK5表达降低的乳腺癌细胞侵袭并穿透Matrivgel膜基质的细胞数量比对照组少(P<0.01),且MMP-2、MMP-9蛋白表达量降低。结论应用小RNA干扰技术降低ARK5蛋白的表达使MDA-MB-435细胞侵袭转移能力降低,同时MMP-2、MMP-9蛋白表达降低,提示ARK5通过MMP-2、MMP-9在乳腺癌侵袭转移中发挥重要作用。; 姬静张宝刚张伟栋郭爱华崔若凡杨兴杰; 关键词：MMP-2 MMP-9 MDA-MB-435 小RNA干扰

ARK5、MMP-2和MMP-9在胃癌中的表达及与侵袭转移的关系被引量：40: 2012年; 目的:探讨ARK5、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在胃癌组织中的表达及与胃癌侵袭转移的关系。方法:免疫组织化学方法检测66例胃癌组织及20例正常胃组织中ARK5、MMP-2、MMP-9的表达;脂质体介导法将ARK5-siRNA转染入胃癌细胞株SGC-7901(siARK5/SGC7901细胞组),以SCRsiRNA转染组(scr/SGC7901细胞组)作为对照组,Western blot检测转染后ARK5、MMP-2、MMP-9蛋白表达;Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力。结果:ARK5、MMP-2、MMP-9在胃癌组织中的阳性表达率分别为68%、76%、68%,三者之间差异具有统计学意义(P<0.05);ARK5的表达与胃癌的浸润深度、细胞分化程度、TNM分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤大小无关(P>0.05);转染后siARK5/SGC7901细胞组表达ARK5、MMP-2和MMP-9蛋白水平降低,体外侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论:ARK5、MMP-2和MMP-9在组织中的表达有相关性,ARK5与胃癌的侵袭和转移密切相关,可作为判断预后的指标和化学治疗的靶点。; 崔若凡张宝刚姬静郭文君; 关键词：胃肿瘤 MMP-2 MMP-9

乳腺癌mTOR基因和蛋白表达与侵袭转移的关系: 2013年; 目的探讨mTORmRNA及编码蛋白在人乳腺浸润性导管癌组中的表达水平及其与侵袭、转移的关系。方法采用原位杂交法和免疫组化(PV-9000)法分别检测65例乳腺浸润性导管癌及32例癌旁正常乳腺组织中mTORmRNA及蛋白水平的表达情况。结果 mTORmR NA在乳腺浸润性导管癌中的阳性表达率(69%,45/65)高于癌旁正常乳腺组织中的阳性表达率(31%,10/32),差异有统计学意义(P<0.01);mTOR蛋白在乳腺浸润性导管癌中的阳性表达率(68%,44/65)高于癌旁正常乳腺组织中的阳性表达率(25%,8/32),差异有统计学意义(P<0.01)。同时,mTORmRNA和蛋白表达水平与乳腺浸润性导管癌的淋巴结转移呈显著正相关(P<0.05),且原位杂交和免疫组化两种检测方法的结果呈显著关联(P<0.05)。结论 mTOR信号通路的激活和异常表达,可能与乳腺癌的侵袭和转移有关,且检测mTORmRNA及蛋白表达水平可作为评价乳腺癌预后的重要指标。; 刘清华孙磊李小龙刘雨清; 关键词：免疫组化原位杂交

Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的研究被引量：5: 2014年; 目的:探讨Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测90例胶质瘤组织中ARK5及Gab2表达。采用小RNA干扰转染LN-229细胞株,Western Blot检测瞬时转染后ARK5及Gab2表达。体外侵袭实验检测转染后侵袭能力变化及Western Blot检测Gab2下降后Akt和ARK5的磷酸化。结果:胶质瘤组织中ARK5和Gab2免疫组织化学阳性结果呈正相关且在高级别胶质瘤(WHO分级为Ⅲ、Ⅳ级)中表达明显高于低级别胶质瘤(WHO分级为Ⅰ、Ⅱ级)。转染ARK5、Gab2、ARK5-Gab2及SCR质粒的LN-229细胞分别称siARK5/LN-229、siGab2/LN-229、siARK5-siGab2/LN-229和SCR/LN-229。其中siARK5干扰效率为70%,siGab2的干扰效率为75%。转染后,与SCR/LN-229相比,siARK5/LN-229中ARK5表达降低,siGab2/LN-229中Gab2表达降低,siARK5-siGab2/LN-229中ARK5和Gab2表达均降低。siARK5/LN-229和siGab2/LN-229侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数均比对照组少(P<0.01),且siARK5-siGab2/LN-229细胞数减少更显著(P<0.01)。在IGF-1刺激下,siGab2/LN-229中Akt和ARK5的磷酸化减弱。结论:应用小RNA干扰技术降低ARK5或Gab2表达使LN-229细胞侵袭转移能力降低,同时Gab2表达降低抑制ARK5和Akt磷酸化,提示Gab2-Akt-ARK5通路参与胶质瘤细胞的侵袭。; 孙磊刘雨清李小龙刘菲张丽娜李洪利张宝刚; 关键词：胶质瘤小RNA干扰

siRNA干扰ARK5蛋白表达对U251细胞侵袭潜能影响机制探讨被引量：2: 2014年; 目的:探讨siRNA干扰降低腺苷酸活化蛋白激酶5(AMPK-related protein kinase 5,ARK5)表达对U251细胞侵袭潜能的影响及其机制。方法:采用蛋白质印迹法检测U251细胞中ARK5表达。应用siRNA干扰技术转染U251细胞株,并采用蛋白质印迹法检测瞬时转染后ARK5蛋白表达情况。通过体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化。ARK5下降后,蛋白质印迹法检测间质细胞来源的YKL-40、N-cadherin、Vimentin蛋白和调节因子Snail、Slug、Twist1和Zeb1的表达。结果:转染ARK5质粒的U251细胞ARK5表达下降。ARK5表达降低的U251细胞侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数量为22,U251对照组为41,SCR/U251对照组为42,两两比较,ARK5表达降低的实验组透膜数比两对照组少(P<0.001),同时蛋白质印迹法结果显示,YKL-40、N-cadherin和Vimentin蛋白表达量降低,与间质转化相关的转录因子仅Snail的表达降低,而转录因子Slug、Twist1和Zeb1表达无明显改变。结论:应用siRNA干扰技术降低ARK5蛋白的表达使U251细胞侵袭转移能力降低,同时YKL-40、N-cadherin和Vimentin蛋白和转录因子Snail的表达量降低,提示ARK5蛋白表达降低可通过调节间质转化影响U251细胞的侵袭。; 孙磊张宝刚李小龙刘清华刘雨清; 关键词：U251 SIRNA干扰

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