国家自然科学基金(30901421)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- AQP5基因重组慢病毒载体的构建与鉴定
- 2011年
- 目的构建人水通道蛋白5(AQP5)基因慢病毒载体。方法体外扩增出AQP5基因全长cDNA,将慢病毒载体pWPTS-GFP与扩增出的AQP5用MluⅠ和SalⅠ进行双酶切,将AQP5全长序列克隆入pWPTS-GFP,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,对长出的克隆用菌落PCR鉴定,再对阳性克隆进行测序和比对分析。重组病毒质粒与另外两种辅助包装原件载体质粒通过CaCl2共转染293T细胞(人胚肾细胞),培养48 h后收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度,并检测慢病毒载体在工具细胞SGC7901细胞(胃癌细胞)的转染效率。Western blot检测SGC7901细胞中AQP5蛋白。结果测序结果和Western blot检测均证明AQP5重组慢病毒载体构建正确,并能在细胞中正确表达。与辅助质粒共转包装细胞获得慢病毒颗粒,并成功感染SGC7901细胞。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为1×108 TU/ml。结论成功构建了稳定表达AQP5基因的重组慢病毒载体。
- 张文杰徐勇王斌徐泽宽杨力沈历宗徐皓
- 关键词：水通道蛋白SGC7901细胞293T细胞慢病毒载体
- 胃癌中水通道蛋白3的表达与淋巴结转移的关系被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨水通道蛋白3(AQP3)在胃腺癌不同分期中的差异表达与淋巴结转移的关系。方法:采用定量PCR、Western blot法对80例不同分期的胃腺癌组织及作为对照的癌旁非肿瘤组织中AQP3 mRNA和蛋白的表达分别进行检测,并与各临床病理分期中淋巴结转移情况进行分析。结果:AQP3在胃腺癌不同分期中的差异表达影响胃癌的淋巴结转移,有淋巴结转移的T1、T2、T3、T4期(UICC,2010)肿瘤组织中AQP3的表达明显高于无淋巴结转移者。结论:胃腺癌肿瘤组织中高表达的AQP3可能对患者淋巴结转移的发生有促进作用,因此AQP3有望成为预测胃腺癌转移和评估预后的重要指标,并可能是胃癌治疗靶点之一。
- 徐勇张文杰杨力徐泽宽徐皓
- 关键词：水通道蛋白3胃腺癌淋巴结转移
