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天津市科技攻关项目(2002113)
作品数:
2
被引量:3
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相关作者:
张万起
王卓
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赵娜
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基于克隆表达的芳香烃受体系统的二噁[口英]生物检测方法研究
2009年
目的研究人工克隆表达的芳香烃受体核转位蛋白(ARNT)与天然芳香烃受体(AhR)特异性结合及其对制备的多克隆抗体识别的情况,通过两者结合与二噁[口英](TCDD)的剂量反应关系,探索TCDD生物检测方法。方法(1)以小鼠肝组织总RNA为模板,通过RT—PCR扩增目的基因AhR—PAS[periodicity (Per)/Aryl hydrocarbon nuclear translocator(ARNT)/single—minded(Sim)]端、AhR羧基末端(AhR—C端)、ARNT—PAS端,构建含有目的基因的pGEX-5XI重组表达质粒,并采用大肠杆菌原核系统进行克隆表达。(2)用上述克隆表达的AhR片段蛋白(AhR—PAS、AhR—C)作为抗原免疫家兔,制备多克隆抗体。(3)从C57BL/6J纯系小鼠肝组织中提取具有结合活性的天然AhR复合物,将天然AhR复合物与结合在谷胱甘肽硫转移酶(GST)上面的融合蛋白GST—ARNT—PAS,分别在0.25、0.50、1.00、2.00pmol TCDD存在的条件下进行结合,通过亲和吸附和免疫印迹观察所形成的蛋白复合物的量。结果(1)成功构建含有目的基因AhR—PAS、AhR—C和ARNT—PAS的重组质粒,并通过大肠杆菌原核系统表达出具有结合活性的目的蛋白;(2)免疫家兔制得的多克隆抗体AhR—PAS、AhR-C的检测下限分别为5、1ng;(3)测得该法制备的小鼠肝脏匀浆中总蛋白质的浓度为60.5mg/ml;在TCDD存在的条件下,克隆得到的融合蛋白GST—ARNT—PAS能够与天然AhR复合物特异性地结合,并测得检测下限为0.25pmol,约80pg TCDD。结论成功地建立了基于克隆表达的芳香烃受体系统的TCDD生物检测方法,且检测下限达到pg级别。
王卓
赵娜
沈钧
王影
汤乃军
吴蕴棠
张万起
宓怀风
关键词:
受体
芳香烃
芳香烃受体核转位蛋白的结构及相关功能
被引量:3
2007年
芳香烃受体核转位蛋白(aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator,ARNT)是碱性螺旋-环-螺旋转录因子超家族中新发现的PAS亚家族的成员之一。它是体内许多bHLH-PAS蛋白共同的专性配偶体,可以与芳香烃受体、低氧诱导因子、果蝇SIM蛋白等形成异二聚体并介导许多信号转导过程,从而使个体对环境污染物(如二恶英)、低氧状态等外界因素的改变产生相应的生物学效应,本文就ARNT的基本结构及其在体内的主要生理功能等方面作一综述。
王卓
张万起
关键词:
转录因子
芳香烃受体
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