国家教育部博士点基金(20114425120010)
- 作品数：3 被引量：14H指数：3
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- 相关机构：广州中医药大学华南理工大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金广东省教育部科技部产学研结合项目中央财政支持地方高校发展专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 茜草中大叶茜草素、羟基茜草素含量测定方法优化的实验研究被引量：8
- 2014年
- 目的 优化茜草中大叶茜草素、羟基茜草素的HPLC含量测定方法。方法采用LUBEXEcosilC18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇-乙腈-0．05％磷酸水（25：50：25），流速1．0mL·min-1检测波长为250nm。结果大叶茜草素和羟基茜草素分别在19．34—161．20μg·mL-1（r=0．9999）和12．16～101．30μg·mL-1（r=0．9999）范围内呈良好线性，平均回收率分别为97．27％（RSD=1．91％）和100．00％（RSD=1．87％）。结论该方法操作简单，重复性好，可作为茜草中大叶茜草素和羟基茜草素的含量测定方法，为合理制定茜草的含测方法提供参考。
- 林文华朱喜梅严萍詹若挺潘华峰刘翠婷张洁
- 关键词：茜草大叶茜草素
- Mincle受体蛋白克隆、原核表达与纯化被引量：3
- 2015年
- 本研究通过应用基因工程技术,构建融合基因pET14b-Mincle的原核表达载体,并将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达目的蛋白Mincle,并对其表达产物进行纯化、鉴定、透析复性。采用RT-PCR技术扩增小鼠Mincle的基因片段,将其克隆于载体pMD18-T中,并克隆到带有His-tag的原核表达载体pET14b中;重组质粒经酶切鉴定、序列比对验证正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达目的蛋白。经1mmol/LIPTG在37℃下诱导5h获得了分子量约为22kDa的重组融合蛋白的优化表达,SDS-PAGE、Western Blot和ELISA证实了重组蛋白的特异性。Mincle以包涵体形式在宿主中表达,利用Ni2+亲和柱进行纯化和生物膜透析复性,纯化和透析后的蛋白经WesternBlot、ELISA法定性鉴别以及用白色念珠菌(SC5314)整个灭活细胞对复性后蛋白的活性测定,透析后的Mincle重组融合蛋白能与白色念珠菌的特异性结合体现其生物活性,表明获得了具有活性的蛋白,为后续研究打下基础。
- 严萍朱喜梅李璐林文华詹若挺唐语谦
- 关键词：基因克隆纯化
- 不同来源威灵仙常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量测定被引量：3
- 2013年
- [目的]测定不同来源威灵仙药材中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量。[方法]采用反相高效液相色潽法,色谱条件为:色谱柱为Waters XbridgeTM-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(90∶10,V/V),体积流量为1 ml/min,检测波长为205 nm,柱温为25℃。[结果]计算得常春藤皂苷元的回归方程为Y=7×106X-429 884,R2=0.999 8,齐墩果酸的回归方程为Y=8×106X-94 259,R2=0.999 1,表明常春藤皂苷元在2.008～25.100 ng/ml范围内,齐墩果酸在2.238～22.380 ng/ml浓度范围内与峰面积有良好的线性关系。不同来源的威灵仙药材齐墩果酸含量基本大于0.3%;来源于两广的威灵仙品种粉灵仙中常春藤皂苷元含量较高,其他来源的威灵仙药材中常春藤皂苷元含量极低。[结论]该方法简单、准确、稳定,可用于威灵仙药材质量评价;不同来源的威灵仙药材在含量上存在较大差异,其中来源于两广的粉灵仙含量较高。
- 李璐林文华严萍詹若挺潘华峰
- 关键词：ET常春藤皂苷元齐墩果酸
