国家重点实验室开放基金(SMFA12K15)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：张成岗李志慧高玉晓吴永红叶巧更多>>
- 相关机构：安徽医科大学军事医学科学院北京放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家重点实验室开放基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 利用单线虫两重PCR技术对秀丽隐杆线虫线粒体DNA拷贝数进行相对定量的方法被引量：1
- 2013年
- 目的基于单线虫两重PCR技术,利用细胞核DNA(nDNA)作为内参研究秀丽隐杆线虫线粒体相对数量的实验条件,进而建立一种相对定量秀丽隐杆线虫线粒体DNA(mtDNA)拷贝数的方法。方法首先以秀丽隐杆线虫nDNA和mtDNA序列为模板,利用多重PCR引物设计软件MPprimer和引物特异性评估软件MFEprimer V2.0设计两重PCR引物;然后针对以单线虫为PCR扩增模板的处理条件进行摸索,包括蛋白酶K的消化浓度及反应时间;最后研究秀丽隐杆线虫nDNA片段和mtDNA片段扩增后到达平台期的时间,进而比较不同循环数扩增下秀丽隐杆线虫线粒体拷贝数相对定量的可行性。结果单线虫经蛋白酶K 60℃消化及95℃灭活处理后,能较特异地扩增出nDNA和mtDNA;单线虫PCR模板的处理条件为50μg/ml蛋白酶K 60℃处理2 min并于95℃灭活10 min;线粒体拷贝数相对nDNA而言,趋于稳定的PCR循环数为26。结论建立了一种以为nDNA内参快速相对定量线粒体拷贝数的方法,为线粒体DNA拷贝数相关的实验研究提供了技术支撑。
- 高玉晓吴永红叶巧李志慧张成岗
- 关键词：线粒体DNADNA拷贝数
- 一种基于双重PCR结合毛细管电泳验证转录组测序结果的新方法
- 2014年
- 目的将双重PCR与毛细管电泳技术相结合,建立一种验证转录组测序结果的新方法。方法根据前期进行转录组测序的分析结果,挑选8个差异基因作为靶基因,分别使用双重PCR结合琼脂糖凝胶电泳、双重PCR结合毛细管电泳以及实时荧光定量PCR进行验证,比较三者的验证率。结果双重PCR结合琼脂糖凝胶电泳的验证率为50%;双重PCR结合毛细管电泳和实时荧光定量PCR的验证率均为100%。结论双重PCR结合毛细管电泳可作为转录组测序结果验证的一种有效方法。
- 易健明高艳李志慧张艳春屈武斌张成岗
- 关键词：转录组测序双重PCR毛细管电泳实时荧光定量PCR
