国家自然科学基金(30770628)
- 作品数：6 被引量：37H指数：4
- 相关作者：单鸿李丹王劲朱康顺周斌更多>>
- 相关机构：中山大学附属第三医院青岛大学医学院附属医院中山大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭被引量：9
- 2011年
- 目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)治疗大鼠急性肝衰竭(ALF)的机制,并示踪MSCs在ALF大鼠体内的分布、迁移。方法①以流式细胞仪检测hrGFP慢病毒感染的UE7T-13细胞株(hrGFP-MSCs)和氯甲基苯甲酰氨(CM-DiI)标记MSCs(MSCs-DiI)的绿色荧光蛋白阳性表达率或红色荧光染料标记阳性率。②CCK-8体外检测MSCs、hrGFP-MSCs和MSCs-DiI的细胞增殖情况。③取SD大鼠38只,建立急性肝损伤模型,30只造模成功,随机分为3组:CCL4组(A组)、CCL4/hrGFP-MSCs组(B组)和CCL4/MSCs-DiI组(C组)。B组和C组造模12 h肝内注射MSCs悬液。④分别于造模24 h、72 h、7天取肝组织以及肺组织观察移植hrGFP-MSCs、MSCs-DiI分布、迁移情况。造模后72 h,检测血清IL-10,TNF-α炎症因子水平,另取肝组织行PCNA免疫组化染色。结果①hrGFP-MSCs的hrGFP表达阳性率达99.21%,MSCs-DiI的CM-DiI标记率为99.98%。②CCK8检测示MSC-DiI、hrGFP慢病毒标记MSCs均不影响其增殖能力。③冰冻切片示CM-DiI标记MSCs可更好地示踪移植细胞,造模24 h、72 h及7天非注射部位肝组织和肺组织MSCs-DiI均可见散在的移植细胞团,而hrGFP-MSCs未见明确荧光阳性细胞。④MSCs治疗ALF大鼠模型下调了系统性炎症应答,造模72 h A组的TNF-α、IL-10水平大于B组及C组;PCNA示MSCs治疗促进了宿主肝细胞增殖。结论 CM-DiI标记MSCs能更好地示踪少量散在的移植细胞。异种移植MSCs可通过下调系统性炎症应答,促进肝细胞增殖,修复ALF大鼠肝组织。
- 赖丽莎陈俊伟王劲李丹李征然单鸿
- 关键词：间充质干细胞肝再生
- 慢病毒介导的增强型绿色荧光蛋白报告基因对间充质干细胞的标记被引量：10
- 2010年
- 目的 探讨慢病毒介导的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记间充质干细胞（MSC）是否影响其细胞生物学特性,以及EGFP基因能否持久稳定表达.方法 以不同病毒感染复数（MOI）实行EGFP慢病毒对MSC的感染,通过流式细胞分析法（FACS）检测EGFP的阳性率,并在荧光显微镜下观察EGFP在MSC的表达情况;通过锥虫蓝染色、MTT比色法、Hoechst染色和FACS检测细胞活力、增殖、凋亡和周期;EGFP慢病毒感染MSC体外持续培养2、4、8、16周时通过FACS检测EGFP的阳性率和荧光强度,以评价EGFP基因在MSC表达的稳定性.结果 EGFP慢病毒以MOI=20感染MSC 96 h,EGFP阳性率达97.39%±0.68%;与对照MsC相比,EGFP慢病毒感染MSC时,对细胞活力、增殖、凋亡和周期均没有影响（P＞0.05）;EGFP-MSC在体外持续培养2,4、8、16周,EGFP阳性率分别为97.50%±0.54%、97.32%±0.51%、97.39%±0.11%、97.48%±0.13%,荧光强度（A值）分别为440 ±13、445±12、458±13、456±16,均能够保持稳定水平.结论 EGFP慢病毒能够高效标记MSC,并且不影响其生物学特性,EGFP基因在MSC能够持久稳定表达,可以用于下一步的细胞示踪研究.
- 李丹朱康顺周斌王劲颜荣华李征然孟晓春黄明声姜在波单鸿
- 关键词：干细胞慢病毒属增强型绿色荧光蛋白
- 压感笔半自动法CT体积测量被引量：2
- 2009年
- 目的探讨压感笔半自动法CT体积测量的准确性和该方法所用的时间,以便更好地应用于临床。方法对CT水模行320排螺旋CT单期容积扫描,分别使用压感笔和光电鼠标作为计算机输入设备半自动法测量CT水模体积,与刻度尺实际测量的体积比较,观察两种输入设备测量CT体积的准确性和所用的时间。结果所测CT水模的压感笔半自动法、鼠标半自动法和实测体积分别为(630.3±2.2)cm3、(631.2±6.7)cm3和(630.3±1.5)cm3,差异无统计学意义(P>0.05)。压感笔半自动法测量所用的时间为(92.8±11.1)s,较鼠标半自动法的(274.4±21.1)s明显缩短。结论压感笔半自动法是测量CT体积较好的方法。
- 胡冰邹艳杨洋王亮王劲朱康顺单鸿
- 关键词：体积测量
- 大鼠骨髓间充质干细胞的超顺磁氧化铁颗粒标记及MR成像被引量：8
- 2008年
- 目的描述超顺磁氧化铁(SPIO)颗粒标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)后对细胞的影响及MR成像特点,评价其标记效果。方法分离、纯化并培养大鼠BMSCs,使用多聚赖氨酸(PLL)对细胞进行SPIO(50μgFe/ml,48h)标记,采用普鲁士蓝染色、细胞内铁含量检测等评定SPIO标记BMSCs的效率;通过台盼蓝染色、二甲基亚砜比色法检测细胞活力和增殖情况,通过Hoechst染色观察细胞凋亡情况,评价SPIO是否影响BMSCs的生物学特性;并对标记的BMSCs进行MR成像(序列:T1SE、T2FSE及T2*GRE)。结果细胞标记率达100%,标记细胞铁含量明显高于未标记细胞;细胞活力、增殖、周期和凋亡检测显示标记细胞与未标记细胞间无统计学差异(P>0.05);MR成像显示标记细胞数目大于5×103个细胞时,3个序列图像均能够观察到信号变化,以T2*WI最为明显。结论大鼠BMSCs可以被SPIO(50μgFe/ml,48h)有效标记,且对细胞的生物学特性无明显影响;1.5TMR能够在体外观察到标记后的细胞。
- 周斌于春鹏李丹姜在波钱结胜朱康顺庞鹏飞单鸿
- 关键词：间充质干细胞超顺磁氧化铁磁共振成像
- 细胞高浓度磁性标记导致细胞外大量纳米颗粒聚集物的形成被引量：1
- 2009年
- 细胞移植在修复和替代受损器官、改善组织功能和基因治疗方面具有重要作用。活体细胞示踪是分子影像学的任务之一，能够实时监测移植细胞靶向迁移、迁移速度以及细胞在靶器官停留时间，有助于指导细胞移植技术在临床的合理应用。MRI具有组织和空间分辨率高、无放射损伤等优点，成为活体细胞示踪的重要研究手段。
- 李丹许杰华周斌朱康顺王劲孟晓春姜在波单鸿
- 关键词：细胞外细胞移植技术磁性细胞示踪
- 磁性／荧光量子点双功能纳米粒子标记大鼠骨髓间充质干细胞被引量：7
- 2010年
- 目的利用磁性／荧光量子点双功能纳米粒子双标记大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC），探讨标记效率和可行性。方法分离、纯化及培养大鼠BMSC。制备二氧化硅（SiO2）同时包裹四氧化三铁（Fe3O4）和碲化镉（CdTe）荧光量子点的磁性／荧光双功能纳米粒子Fe3O4@CdTe@SiO2，利用铁浓度为25μg／ml的Fe3O4@CdTe@SiO2标记BMSC，未标记的BMSC作为对照组。通过荧光显微镜观察细胞内纳米粒子的荧光表达情况。双标记后的BMSC分成8个不同数量级（3×10^6～1×10^3个），应用1．5T磁共振扫描仪进行T1WI、T2WI和T2^＊WI3个序列成像。分光光度计测量细胞铁含量，普鲁士蓝染色显示细胞内铁。结果荧光显微镜下可见双标记组细胞内Fe3O4@CdTe@SiO2纳米粒子显示为红色荧光，细胞标记率达到90％以上。磁共振成像可见3×10^6～5×10^4双标记组细胞较对照组T2WI、T2^WI信号减低，两组之间的信号差异随数量级减小而相应减小，T2^＊WI信号变化最明显，T2WI次之。细胞铁含量为（14．05±4．15）pg／细胞，普鲁士蓝染色可见双标记细胞胞质内蓝染的含铁颗粒。结论Fe3O4@CdTe@SiO2纳米粒子可同时对大鼠BMSC进行磁性和荧光双标记，有望成为磁共振和光学成像活体示踪移植后BMSC的有效手段。
- 颜荣华单鸿聂立波李丹王劲朱康顺王红飞马栋张黎明
- 关键词：干细胞磁共振成像放射性示踪剂
