四川省教育厅资助科研项目(08zb075)
- 作品数：2 被引量：15H指数：1
- 相关作者：文心田黄小波曹三杰余慧徐璐更多>>
- 相关机构：四川农业大学四川省动物疫病预防控制中心西南交通大学更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划四川省教育厅资助科研项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪轮状病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：14
- 2009年
- 用差速离心法纯化的猪轮状病毒(RV)分别免疫仔猪和兔,制备了猪抗RV和兔抗RV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测RV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:猪抗RV IgG包被浓度为4μg/mL,兔抗RV IgG最佳工作浓度为3.5μg/mL,样品反应时间为90 min,酶标抗体工作浓度为1∶8 000,以D450 nm≥0.161作为阳性判定标准。该ELISA的重复性变异系数小于10%,最低检测限为1.25μg/mL,并与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪大肠杆菌和沙门菌等病原无交叉反应,该ELISA试剂在室温和4℃条件下至少可保存4个月。用该ELISA方法和RV金标检测卡检测70份临床粪便样品,结果显示,ELISA的阳性检出率为22.9%,而金标检测卡的阳性检出率为20.0%。表明,建立的双抗体夹心ELISA方法具有特异性好、灵敏性高和重复性好等优点,可用于RV的快速检测。
- 黄小波徐璐曹三杰文心田曾燕余慧
- 关键词：猪轮状病毒双抗体夹心酶联免疫吸附试验
- 猪传染性胃肠炎病毒重组N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2009年
- 以纯化的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,通过间接ELISA法对融合细胞进行筛选,采用有限稀释法对阳性细胞进行4次亚克隆,获得了3株能稳定分泌N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为JY(4)-1、JY(4)-2、JY(4)-3。分别采用体外培养法、诱导腹水法和实体瘤法制备单克隆抗体,并用间接ELISA法检测其效价,结果显示,这3株杂交瘤细胞的细胞培养上清、小鼠腹水和血清的单抗效价均分别为1∶512、1∶105、1∶105,其中以诱导腹水法制备的单抗产量和效价最佳。间接免疫荧光试验结果显示,这3株单抗均能与TGEV感染的ST细胞产生特异性免疫荧光,而不与猪细小病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、猪轮状病毒等发生交叉反应;经鉴定,3株单抗的亚类均为IgG2a,这3株杂交瘤细胞具有良好的遗传稳定性。
- 黄小波李娜文心田曹三杰余慧杨恒秦学远尹杰
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒重组N蛋白单克隆抗体杂交瘤
