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慢病毒介导的RNA干扰对大鼠神经元PKCγ mRNA及蛋白表达的影响: 2010年; 目的探讨慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）对大鼠神经元PKCymRNA及蛋白表达的影响.方法孕16d的SD大鼠,原代培养大鼠胚胎皮层神经元,随机分为3组,每组6孔,对照组（C组）：不行任何处理;阴性对照组（NC组）：每孔加入阴性对照慢病毒3×10^5个;RNAi组：每孔中加入编码PKCγ shRNA的慢病毒载体（LV-PKCγ shRNA）颗粒3×10^5个.5 d后采用RT-PCR和Western blot法检测PKCγ mRNA和蛋白的表达水平,并计算干扰效率.结果与C组比较,RNAi组大鼠神经元PKCγ mRNA及其蛋白表达水平均降低（P〈0.05）,NC组上述指标差异无统计学意义（P〉0.05）.基因干扰效率99.3%,蛋白干扰效率85.2%.结论慢病毒介导的RNAi可有效地下调大鼠原代神经元PKCγ基因及其蛋白的表达.; 邹望远郭曲练宋宗斌刘畅潘韫丹; 关键词：RNA干扰慢病毒属神经元

神经病理性痛大鼠脊髓蛋白质组图谱的建立被引量：1: 2008年; 目的建立神经病理性痛大鼠脊髓蛋白质组图谱。方法成年雄性SD大鼠16只，体重260～320g，随机分为2组（n=8）：假手术组（S组）和神经病理性痛组（NP组）。采用慢性缩窄性坐骨神经损伤法（CCI）制备大鼠神经病理性痛模型，S组仅暴露坐骨神经，不结扎。分别于CCI前1d（基础状态）及CCI后5、7d测定机械痛阈和热痛阈；于CCI后7d痛阈测定结束后取腰段脊髓组织，每组大鼠的脊髓组织混合后提取总蛋白质，测定脊髓组织蛋白质含量。以固相pH值梯度等电聚焦（IEF）为第一向，SDS—PAGE垂直电泳为第二向进行双向凝胶电泳（2-DE），制备脊髓蛋白质2-DE图谱，应用图像分析软件分析2-DE图谱，并观察其差异表达情况。结果与S组比较，NP组CCI后机械痛闽和热痛阈降低（P〈0．05）；两组大鼠脊髓组织总蛋白质经双向凝胶电泳分离，银染显色后得到分辨率高、重复性好的2-DE图谱，蛋白质点主要分布在pH3～10，相对分子质量为8～120的区域；NP组差异表达的蛋白质有23个，其中16个蛋白质表达上调，7个蛋白质表达下调（P〈0．05）；表达上调幅度最大的为SSP2203蛋白，表达下调幅度最大的为SSP1807蛋白（P〈0．05）。结论本研究成功地建立了神经病理性痛大鼠脊髓蛋白质组的图谱。; 邹望远李茂玉郭曲练宋宗斌张重赵媛贺正华; 关键词：神经痛脊髓蛋白质组学

PKCγ基因RNAi慢病毒载体的构建被引量：1: 2010年; 目的构建蛋白激酶CT（PKCT）基因RNA干扰（RNAi）慢病毒载体。方法针对已经筛选确定的PKCγ基因RNAi有效靶序列，合成靶序列的短发夹RNA（shRNA）寡核苷酸序列（Oligo）DNA，退火形成双链DNA，与经AgeI和EcoRI酶切后的pGCSIL-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白（GFP）]连接，转化DH5a大肠杆菌，挑选重组阳性克隆行PCR鉴定和DNA测序。用pGCSIL-GFP、pHelper 1．0和pHelper2．0三质粒共转染293T细胞，包装产生慢病毒，逐孔稀释滴度法测定病毒滴度。结果PCR鉴定结果显示，以经双酶切后未插入片断的pGCSIDGFP空载体（PCR产物为306bp）为对照，重组细菌克隆的PCR产物为343bp（插入片段为37bp），鉴定结果与预期相符。测序结果显示，合成的PKC7基因shRNA寡核苷酸链序列插入正确。包装慢病毒，浓缩慢病毒悬液的滴度为1×10^9TU／ml。结论成功构建了PKCT基因shRNA慢病毒载体。; 邹望远郭曲练宋宗斌罗和国张重刘畅; 关键词：RNA干扰蛋白激酶C

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国家自然科学基金(30801074)

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