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凡纳滨对虾海水养殖系统内细菌群落的PCR-DGGE分析被引量：36: 2009年; 采用PCR-DGGE(PCR-denaturing gradient gel electrophoresis)技术对一个典型的凡纳滨对虾(Litopeneaus vannamei)海水养殖系统细菌群落进行分子分析。结果表明,沿岸水、蓄水池、养殖池水具有较高的细菌种类多样性,而蓄水池进水、对虾粪样、肠壁定植细菌样以及排水渠污水的细菌多样性程度低。每种环境群落的优势种明显。3个养殖池水样(Y1、Y2、Y3)、2个沿岸水样(W1、W2)、2个粪样(F1、F2)、蓄水池水样(B1、B2)及2个肠壁定植细菌样(G1、G2)各自具有高度群落相似性。BLAST结果表明,12个条带克隆序列所代表优势种很可能来源于以下几个属:柔发菌属(Flexithrix)、黏纤维菌属(Cytophaga)、Dyella属、聚球菌属(Synechococcus)、Chlorarachnion属、支原菌属(Mycoplasma)、草螺菌属(Herbaspirillum)、河氏菌属(Hahella)、Ruegeria属。本研究表明,PCR-DGGE技术可以用于海水对虾养殖系统的细菌群落结构分析。对于海水对虾养殖系统来说,一些序列所代表的主要细菌种类极有可能是很少被注意到或研究过的,具有潜在的研究价值。; 罗鹏胡超群张吕平任春华; 关键词：凡纳滨对虾细菌群落

三株海洋酵母的生化营养成分分析被引量：8: 2009年; 海洋酵母是一种重要的水产生物饵料。实验对3株海洋酵母菌德巴利酵母Debaryomyces sp.、克鲁维酵母Kluyveromyces sp.和虫道酵母Ambrosiozyma sp.的基础营养成分进行了研究和分析。3株海洋酵母菌的粗蛋白含量分别为56.87%、46.75%、51.80%;脂肪分别为4.67%、6.35%、6.35%;碳水化合物分别为31.28%、41.55%、35.96%;灰分分别为7.18%、5.35%、6.37%。3株海洋酵母菌具有较高的蛋白含量水平以及优良的氨基酸和脂肪酸组成,表明该3株海洋酵母菌具有用作水产饵料生物的营养价值。但是,3株海洋酵母菌均缺乏多不饱和脂肪酸EPA和DHA,用其作为水产饲料源料,需要在配合饲料中添加多不饱和脂肪酸或与富含多不饱和脂肪酸的藻类一起使用。; 蔡诗庆胡超群任春华; 关键词：海洋酵母饵料氨基酸脂肪酸

34株副溶血弧菌16S-23SrDNA间区多态性DGGE分析被引量：3: 2010年; 采用PCR-变性梯度凝胶电泳技术(PCR-DGGE)分析比较了34株分离于环境和水产养殖动物体内的副溶血弧菌及标准株16S-23S rDNA间区(Intergenic Spacer Region,ISR)的多态性和亲缘关系。结果表明,34株副溶血弧菌的ISR经PCR-DGGE电泳后均能分离出4―10条条带,共计产生15个多态性位点。所有菌株聚为H、I、J、K四大簇,株间遗传差异最大为株A18和A25,遗传距离达到0.4。ISR PCR-DGGE方法为副溶血弧菌基因分型提供了一种新的方法。; 苏婷罗鹏胡超群任春华; 关键词：副溶血弧菌 RDNA间区

溶藻弧菌溶血素基因反向PCR克隆及其原核表达被引量：3: 2009年; 溶藻弧菌的胞外产物(ECP)在其致病过程中发挥重要作用,已经观察到溶藻弧菌ECP所致的溶血现象,关于溶藻弧菌溶血素的种类和其对溶藻弧菌的致病性贡献的报道非常稀少。利用已经报道的多种弧菌溶血素基因序列设计通用引物,检测溶血素基因在溶藻弧菌中的分布,发现96个菌株中有74株扩增出溶血素基因(vah)片段。对致病株ZJ0451的vah片段测序。根据已测得的片段序列设计引物,通过反向PCR扩增及后续克隆测序获得全长vah基因及部分侧翼序列。经比对证实溶藻弧菌vah与多种弧菌的TLH类溶血素高度相似,且其肽链N端有信号肽。利用pET32a载体构建了两种包含不同长度融合标签的vah表达载体,并均在大肠杆菌BL21(DE3)中获得可溶性表达。在26℃的诱导温度下,9 h时vah表达量达到相对最大。在原核表达系统中,vah蛋白信号肽可以被切除。; 罗鹏胡超群; 关键词：溶藻弧菌溶血素反向PCR

拟态弧菌全长toxR基因的克隆和序列分析被引量：2: 2008年; 对克隆的拟态弧菌Vibrio mi micus的全长toxR基因及进行相关的序列分析。根据已发表的其他几种弧菌toxR基因两翼核苷酸序列,设计和合成上下游简并引物,以拟态弧菌1.1969标准株的基因组DNA为模板进行PCR扩增,将获得的1.3kb扩增片断进行克隆、鉴定和测序,并将该序列提交至GenBank(登录号为EF693743)。首次获得拟态弧菌840bptoxR基因全长核苷酸序列。与其它弧菌的相应序列分析比对显示,该序列与霍乱弧菌Vibrio cholerae的toxR基因有87%—88%的相似性,与鳗弧菌Vibrio anguillarum的toxR基因有75%的相似性,与副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus的toxR基因有45%的相似性。该基因编码1个含有279个氨基酸残基的蛋白质,其分子量为31.13kDa,等电点为5.35,并含有一个典型的转录激活区和一个跨膜区。系统发育树分析表明,几种常见致病性弧菌的toxR基因序列存在较大分歧,拟态弧菌能较容易与进化相近的霍乱弧菌鉴别区分开来。toxR基因全长核苷酸序列的获得将为拟态弧菌的菌种鉴定增添新的分子靶标,有助于其结构和功能的研究及通过突变分析鉴定出新的受toxR基因调控的致病基因。; 王青柏胡超群罗鹏任春华; 关键词：拟态弧菌致病性弧菌

鳗弧菌rpoS基因克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：1: 2009年; 鳗弧菌是海水鱼类弧菌病的重要病原,弧菌病的发生及流行与该菌在环境中的生存密切相关。RpoS因子是细菌RNA聚合酶的主要组成部分,能够调控细胞对不良环境的抵抗和适应能力。本文从鳗弧菌W-1基因组DNA扩增1 002 bp的特异性片段,序列分析表明含有完整的rpoS基因阅读框,编码333个氨基酸残基的蛋白质。与其他鳗弧菌菌株的rpoS基因序列相似性为100%,与霍乱弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌、溶藻胶弧菌rpoS基因的序列相似性分别为78%,77%,77%,76%,75%,与大肠杆菌的序列相似性为71%。将该基因克隆于表达质粒pET-24d(+),在大肠杆菌中表达,用镍亲和层析柱纯化表达蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化的蛋白为单一条带,蛋白分子量约42 kDa,与理论分析值相近。研究结果为探索鳗弧菌对自然环境的适应及疾病发生机制提供了依据。; 马莉陈吉祥刘瑞魏鉴腾姜荧安; 关键词：鳗弧菌克隆纯化

鳗弧菌W-1金属蛋白酶基因真核表达载体的构建及其在动物细胞中的表达: 2010年; 采用基因克隆方法,以带有突变的鳗弧菌W-1金属蛋白酶基因的原核表达质粒pET24d(+)/m-empA7为模板,通过PCR扩增得到m-empA7基因,将其插入pCDNA3.1(+)构建重组真核表达质粒pCDNA3.1(+)/m-empA7;然后用磷酸钙法将其转染入动物细胞CHO和HEK293T中并进行瞬时表达,分别以RT-PCR和Western-blot检测重组质粒的基因转录和蛋白表达情况。结果表明,成功将突变的鳗弧菌W-1金属蛋白酶基因转染至真核细胞中,并能够在动物细胞中正确地转录和表达,为鳗弧菌基因工程疫苗的研制奠定了基础。; 杨慧陈吉祥张晓华李筠薛小平; 关键词：金属蛋白酶真核表达基因疫苗

从鳗弧菌M3 Fosmid文库筛选aroA基因: 2008年; 为克隆鳗弧菌 aroA 基因(它在细菌中编码合成芳香族氨基酸的关键酶——5-烯醇氏丙酮酰莽草酸3-磷酸(EPSP)合成酶),在实验室中构建了鳗弧菌 M3大分子量基因组Fosmid 文库,并通过克隆测序获得了部分序列,以此为基础,通过延伸测序获得了 aroA 基因序列全长。该基因全长1281bp,编码427个氨基酸,包含一个11个氨基酸残基的信号肽;编码区 GC 平均含量为46.8%,推测分子量为46177 Da。相似性分析表明,鳗弧菌的aroA 核苷酸和氨基酸序列与其他弧菌的相似性最高,分别在73%～75%和78%～82%;进化树结果也表明鳗弧菌 aroA 与其他弧菌的亲缘关系最近。aroA 基因的克隆为构建鳗弧菌弱毒疫苗奠定了基础。; 叶旭红茅云翔莫照兰郝彬邹玉霞李杰; 关键词：鳗弧菌生物信息学分析

鳗弧菌膜绑定溶胞壁质转糖酶MltD的表达纯化及生物信息学分析: 2011年; 本研究将新发现的鳗弧菌毒力相关基因mltD(膜绑定溶胞壁质转糖酶基因)克隆于表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并以镍琼脂糖亲和层析柱纯化表达的融合蛋白;经SDS-PAGE分析,纯化的融合蛋白为单一条带,分子量约为70.2 kDa,与理论预测值相符。生物信息学分析表明,鳗弧菌MltD由523个氨基酸组成,与其他弧菌的MltD氨基酸序列有较高的相似性;二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主;功能区包括N端的信号肽区域、1个糖基转移酶结构域和C端的3个溶解酶结构域;蛋白的N端具有一段脂蛋白信号肽,信号肽外的其他部分为非细胞质蛋白。鳗弧菌MltD蛋白为亲水性;不稳定系数为27.40,属于稳定性蛋白;整个蛋白分子共有24个可能的抗原决定簇,具有较强的抗原性。推断MltD蛋白为1种外周膜脂蛋白,在弧菌中相对保守,抗原性强,可应用于抗弧菌病疫苗的开发研制。; 徐子男张晓华; 关键词：鳗弧菌原核表达纯化生物信息学分析

分子鉴定方法研究大亚湾水体弧菌种类变化被引量：5: 2010年; 借助分子鉴定方法监测大亚湾水体中弧菌Vibrio种类季节性动态的变化规律。通过增菌培养、菌株分离,在224份海水中共分离出弧菌368株,并用分子生物学辅助生化鉴定方法鉴定弧菌菌株。结果表明,在大亚湾海域水体中鉴定的弧菌种类有溶藻弧菌Vibrio alginolyticus、副溶血弧菌V.parahaemolyticus、哈氏弧菌V.harveyi和创伤弧菌V.vulnificus,没有检测到霍乱弧菌V.cholerae、拟态弧菌V.mimicus、河流弧菌V.fluvialis和霍利斯弧菌V.hollisae。溶藻弧菌和副溶血弧菌为优势菌群,分别占弧菌总数的27.99%和21.74%。; 江晓任春华胡超群罗鹏陈偿冯敬宾; 关键词：弧菌分子生物学鉴定季节性分布

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国家重点基础研究发展计划(2006CB101803)

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