江西省教育厅科技计划项目(GJJ09089)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- pEGFP-PTEN的构建及其在子宫内膜癌细胞HEC-1B中的表达
- 2011年
- 目的:利用分子克隆方法构建增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)与抑癌基因PTEN(phosphatase and tensin homologue)融合表达载体,为研究PTEN对子宫内膜癌细胞生物学作用奠定基础。方法:应用RT-PCR(reversing transcription polymerase chain reaction)方法获得正常人胚肾细胞293T中PTEN片段,先克隆至pMD18-T载体,对其进行测序分析,双酶切后与pEGFP-N2载体连接构建pEGFP-N2-PTEN重组质粒,用琼脂糖凝胶电泳检测。将子宫内膜癌细胞分3组,第一组转染pEGFP-N2空载体,第二组转染pEGFP-N2-PTEN重组质粒,第三组未转染做空白对照,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞内的表达情况,采用Western blot法检测PTEN蛋白的表达。结果:pMD18-T-PTEN质粒测序与GenBank中人PTEN编码区(CDS)序列一致,pEGFP-N2-PTEN重组质粒经双酶切后用琼脂糖凝胶电泳检测到两个大小分别为1.4 kb和4.7 kb的片段,且在子宫内膜癌中表达成功,Western blot检测出质粒转染组中PTEN蛋白质高表达。结论:成功构建了pEGFP-N2-PTEN重组真核表达质粒,在HEC-1B细胞中高表达,为子宫内膜癌的基因治疗研究提供理论基础。
- 黄婷婷王萌彭小刚曹青
- 关键词：质粒构建
