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补中益气汤与siRNA对肺腺癌A549/DDP细胞耐药逆转作用的比较被引量：4: 2014年; 目的比较补中益气汤含药血清与siRNA技术(RNA)对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP的耐药效果及对多药耐药蛋白P-gp表达的影响。方法制备补中益气汤含药血清,设计并合成针对P-gp基因对应序列的siRNA,转染A549/DDP细胞;实验分组为空白对照组、补中益气汤含药血清处理组、siRNA处理组,利用RT-PCR检测P-gp mRNA,Western印迹及免疫细胞化学法检测P-gp蛋白质的表达;MTT法检测A549/DDP细胞耐药逆转效果。结果补中益气汤含药血清和siRNA均能降低P-gp mRNA和蛋白质表达,恢复顺铂敏感性,耐药倍数分别降至2.01、2.73,具有统计学意义(P<0.05)。结论补中益气汤含药血清和siRNA均能有效逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的多药耐药。; 李璐璐于丹王莹井欢刘春英; 关键词：补中益气汤 SIRNA A549/DDP细胞 P-GP 耐药逆转

补中益气汤对A549/DDP肺腺癌耐药动物模型中凋亡相关信号分子caspase-9的影响被引量：7: 2014年; 目的研究补中益气汤对肺腺癌荷瘤BALB/c小鼠实体瘤中凋亡相关信号分子Caspase-9表达的影响,探讨其对肺腺癌可能的作用机制。方法体外培养肺腺癌A549/DDP细胞,接种健康BALB/c小鼠,荷瘤成功后予补中益气汤治疗,实验分为:荷瘤对照组,补中益气汤低剂量组及补中益气汤高剂量组。观察转移病灶情况,利用RT-PCR检测Caspase-9 mRNA的表达,免疫组化法检测Caspase-9蛋白表达。结果同荷瘤对照组相比,高、低剂量的补中益气汤均可上调凋亡相关信号分子Caspase-9 mRNA和蛋白的表达水平,并且补中益气汤高剂量组效果优于低剂量组。结论补中益气汤对肺腺癌的抑制作用可能与Caspase-9表达上调相关。; 井欢于丹唐莹刘春英; 关键词：补中益气汤 CASPASE-9 肺腺癌A549 BALB C小鼠

补中益气汤对A549/DDP动物模型实体瘤中耐药相关酶GST和TopoⅡ表达的影响被引量：4: 2014年; 目的研究补中益气汤对A549/DDP细胞荷瘤小鼠实体瘤中耐药相关酶GST和TopoⅡ表达的影响,探讨补中益气汤的作用机制。方法体外培养A549/DDP细胞,接种健康BALB/c小鼠,荷瘤成功后予补中益气汤治疗,实验分为:荷瘤组,补中益气汤低剂量组及补中益气汤高剂量组。取实体瘤后,利用RT-PCR检测GST和TopoⅡmRNA的表达,免疫组化法检测蛋白表达。结果同荷瘤组相比,高低剂量的补中益气汤均可降低耐药相关酶GST和TopoⅡmRNA表达水平,但补中益气汤高剂量组效果同低剂量组区别不大(>0.05)。同荷瘤组相比,高低剂量的补中益气汤均可降低耐药相关酶GST和TopoⅡ蛋白的表达(<0.05),补中益气汤高剂量组的效果优于补中益气汤低剂量组(<0.05)。结论补中益气汤能下调A549/DDP实体瘤中耐药相关酶GST和TopoⅡ的表达水平。; 井欢于丹唐莹刘春英; 关键词：补中益气汤 GST TOPO BALB C小鼠

补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株裸鼠移植瘤作用及其机制的研究被引量：6: 2014年; 目的探讨补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP裸鼠移植瘤的作用机制。方法 60只裸鼠随机分为6组,空白对照组给予生理盐水0.5ml灌胃,其余5组以5×106/L的A549/DDP接种于裸鼠皮下,待成瘤后,分别给予生理盐水0.5ml灌胃,0.2ml顺铂腹腔注射同时生理盐水灌胃,0.2ml顺铂腹腔注射顺铂和高、中、低剂量的补中益气汤灌胃。观察A549/DDP细胞在各组裸鼠的致瘤率,计算抑瘤率;采用免疫组化方法、RT-PCR(real time PCR)检测移植瘤组织中PI3K、AKT的表达水平。结果补中益气汤高、中、低剂量组能不同程度的抑制移植瘤的生长,其中以高、中剂量组最显著,与顺铂组抑瘤率比较有明显的统计学差异(P<0.05);移植瘤中PI3K、AKT蛋白表达和mRNA基因的表达在补中益气汤高、中、低剂量组中均有下降,高、中剂量组降低较多,与顺铂组和小剂量比较有统计学差异(P<0.05)。结论补中益气汤联合顺铂对肺腺癌移植瘤的增殖有明显的抑制作用,补中益气汤能通过调控PI3K、AKT基因和蛋白的表达而干预顺铂的耐药机制,这种干预作用具有一定的量效关系。; 刘亚莉唐莹易佳丽井欢刘春英; 关键词：补中益气汤肺腺癌移植瘤裸鼠 PI3K

补中益气汤含药血清对人肺腺癌A549/DDP细胞耐药作用的影响被引量：9: 2014年; 目的:观察补中益气汤含药血清对人肺腺癌细胞株A549/DDP耐药作用的影响并探讨其机制。方法:采用血清药理学方法制备含药血清;用MTT比色法筛选出最佳含药血清;以最佳含药血清和不同浓度梯度的顺铂干预A549和A549/DDP细胞,MTT比色法计算2种细胞的IC50,同时计算A549/DDP耐药指数和逆转指数;将A549/DDP细胞分为对照血清组、最佳含药血清组、LY294002组、LY294002+最佳含药血清组(联合组)和阴性对照组,给予相应的处置因素后,培养48 h,采用免疫细胞化学方法、Western blotting和real-time PCR等方法检测各组中PI3K、Akt蛋白与mRNA的表达情况。结果:10%中剂量含药血清作用48 h为最佳含药血清及最佳作用时间。最佳含药血清与顺铂联合作用时,A549/DDP细胞对顺铂的敏感性明显增强,最佳含药血清的逆转指数约为2.46。最佳含药血清组和联合组的PI3K、Akt蛋白和mRNA的表达水平均下降,与对照血清组比较差异有统计学意义(P<0.05)。LY294002组的PI3K、Akt蛋白和mRNA的表达水平与对照血清组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:补中益气汤通过减少PI3K的表达而降低A549/DDP细胞的耐药指数,增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,干预或调整A549/DDP细胞对顺铂的耐药作用。; 刘亚莉王莹易佳丽史妍婷刘春英; 关键词：补中益气汤含药血清肺腺癌 AKT蛋白

六君子汤含药血清对A549/DDP细胞及E-cadherin和N-cadherin表达的影响被引量：3: 2017年; 目的研究六君子汤含药血清对人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)顺铂(DDP)耐药的作用及其对上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和神经钙黏蛋白(N-cadherin)表达的影响。方法采用血清药理学方法制备含药血清,随机将40只SD大鼠分为血清对照组和六君子汤(高、中、低剂量)含药血清组,每日灌胃给药1次,连续5天后提取血清。再用培养液将各组血清稀释成5%和10%浓度作用于A549/DDP细胞株12h、24h、48h,以此筛选出最佳浓度及最佳作用时间点。MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,计算耐药逆转倍数;免疫细胞化学法和Western blot检测各组细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达。结果六君子汤含药血清对A549/DDP细胞有明显抑制作用,且呈浓度和时间依赖关系,中剂量10%浓度含药血清作用48h作用较强且细胞毒性低,在此浓度下,TGF-β1诱导的A549/DDP的IC50明显下降(P<0.05),对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数为4.12,E-cadherin表达水平上调,N-cadherin的表达水平下调。结论六君子汤含药血清逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药可能与抑制细胞上皮-间质转化,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关。; 甄芳于丹刘春英; 关键词：A549细胞株 E-CADHERIN 耐药逆转

补中益气汤含药血清干扰A549/DDP生长作用的实验研究被引量：9: 2013年; 目的从细胞水平探讨补中益气汤含药血清改善A549/DDP耐药作用并选择最佳含药血清的浓度。方法采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备高、中、低剂量补中益气汤的含药血清,分别以5%和10%的浓度作用于人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP 48 h,观察补中益气汤含药血清对A549/DDP生长的影响并通过MTT法检测各组细胞的抑制率,以此筛选出最佳含药血清浓度,计算出最佳浓度含药血清对A59/DDP的耐药逆转倍数。结果补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞有明显抑制作用,且呈浓度依赖关系。5%高剂量组对A549/DDP的抑制率高于5%中剂量组和5%低剂量组,并与5%空白血清组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。10%各剂量组对A549/DDP的抑制率与10%空白血清组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。经筛选,10%中剂量含药血清作用48 h为最佳干扰浓度,在此浓度下,A549/DDP对顺铂的IC50明显下降(P<0.05),对A549/DDP细胞的逆转倍数为2.46。结论 10%中剂量含药血清干扰48 h可作为后期药物实验的含药血清加药浓度及观察时间筛选的实验依据,补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP的耐顺铂作用。; 易佳丽刘春英; 关键词：A549 A549细胞株耐药逆转

补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞PI3K/AKT信号转导通路影响的实验研究被引量：8: 2014年; 目的观察补中益气汤含药血清对肺腺癌顺铂耐药细胞A549/DDP的抑制作用,并探讨其对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白和mRNA表达的影响。方法以SD大鼠制备高、中、低剂量的补中益气汤含药血清和空白对照血清。MTT法筛选最佳含药血清组。培养细胞分为空白血清组、最佳含药血清组、LY294002组(阻滞剂组)、最佳含药血清+LY294002组(联合组)和阴性对照组。免疫细胞化学方法和实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测PI3K、p-AKT蛋白和mRNA的表达情况。结果随着含药血清浓度的升高,对顺铂的逆转倍数不断增加;中剂量含药血清作用48 h为最佳含药血清及最佳作用时间;最佳含药血清可使A549/DDP细胞中PI3K、p-AKT蛋白表达减少,与空白血清组比较差异有统计学意义(P<0.05);补中益气汤诱导A549/DDP细胞PI3K、p-AKT mRNA表达显著减少,与空白血清组比较,差异有统计学意义(P<0.05),与阻滞剂联合作用p-AKT mRNA下降更为明显。结论补中益气汤可通过降低A549/DDP细胞中PI3K、p-AKT mRNA的表达而影响PI3K/AKT信号转导通路,进而发挥对顺铂耐药的增敏作用。; 刘亚莉易佳丽王莹井欢刘春英; 关键词：补中益气汤磷脂酰肌醇3激酶

补中益气汤对A549/DDP肺癌荷瘤BALB/c小鼠耐药相关蛋白MRP表达的影响被引量：3: 2014年; 目的研究补中益气汤对A549/DDP肺癌荷瘤BALB/c小鼠实体瘤中耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)表达的影响,探讨补中益气汤对A549/DDP的治疗作用机制。方法体外培养A549/DDP细胞,接种健康BALB/c小鼠,荷瘤成功后予补中益气汤治疗,实验分组为:荷瘤对照组,补中益气汤低剂量组及补中益气汤高剂量组,利用RT-PCR检测实体瘤MRP mRNA的表达,免疫组化法检测MRP蛋白表达。结果同荷瘤对照组相比,高、低剂量的补中益气汤均可降低耐药相关蛋白MRP的表达水平,且补中益气汤高剂量组效果同低剂量组相比无明显区别。结论补中益气汤的抗肿瘤作用可能与其降低MRP的表达相关。; 井欢于丹唐莹刘春英; 关键词：补中益气汤耐药相关蛋白 BALB C小鼠

补中益气汤含药血清逆转A549/DDP的顺铂耐药及对mTOR表达的影响被引量：17: 2013年; 目的:研究补中益气汤含药血清对肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)顺铂耐药的逆转作用及对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达的影响。方法:动物随机分组,制备补中益气汤高、中、低剂量血清(给药剂量分别为11.34,5.67,2.83 g.kg-1.d-1),将A549,A549/DDP细胞体外分为顺铂(DDP)组,空白血清+DDP组,含药血清高剂量+DDP组,含药血清中剂量+DDP组,含药血清低剂量+DDP组,细胞对照组,经过15%各组血清联合DDP不同浓度(10,20,40,80,100,200μmol.L-1)作用48 h,采用MTT法检测补中益气汤不同浓度含药血清对A549/DDP顺铂耐药的逆转作用;采用免疫荧光,免疫细胞化学,Western-blot方法检测mTOR的表达。结果:与DDP组比较,补中益气汤不同浓度含药血清作用于A549/DDP后IC50和耐药倍数均有显著降低(P<0.05),以补中益气汤中剂量组(等临床剂量组)作用最为显著(P<0.01),A549/DDP中mTOR的染色吸光度及荧光强度均明显减弱(P<0.01),蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:补中益气汤能增强A549/DDP对顺铂的敏感性,并能通过降低细胞生存通路中mTOR的表达而有效逆转肺腺癌细胞的顺铂耐药。; 史妍婷井欢王莹易佳丽刘春英; 关键词：补中益气汤哺乳动物雷帕霉素靶蛋白

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