辽宁省教育厅高等学校科学研究项目(L2010267)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- Prestin蛋白的稳定高表达卵巢细胞株的建立
- 2011年
- 目的：建立体外稳定高表达耳蜗外毛细胞马达蛋白（prestin）的多克隆中国仓鼠卵巢细胞株（CHO）。方法：采用prestin质粒转染CHO细胞进行表达,高浓度博来霉素400800mg/L筛选出多克隆细胞株,传代培养,同时长时间维持低浓度抗生素（200400mg/L）。收集所筛选的多克隆细胞株,提取总RNA,采用针对prestin蛋白不同片段设计的3对引物,进行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）,对扩增产物进行凝胶电泳分析。采用免疫荧光染色方法鉴定所筛选多克隆细胞株的prestin蛋白表达。结果：采用3对不同的prestin引物的RT-PCR结果均为阳性,而对照组则为阴性;利用prestin蛋白的特异性抗体,对所筛选的多克隆细胞株进行免疫荧光染色鉴定结果显示阳性率〉90%。结论：成功获得稳定高表达prestin蛋白的多克隆CHO细胞株,转染表达率高。
- 于利
- 关键词：CHO细胞耳蜗毛细胞听觉逆转录聚合酶链反应免疫测定
