吉林省科技厅应用基础研究项目(200705335)
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 相关作者：王茜杜珍武张桂珍马青山卜丽莎更多>>
- 相关机构：吉林大学中日联谊医院吉林大学第二医院吉林大学更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅应用基础研究项目吉林省卫生厅资助项目吉林省科技厅科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 四环素调控HSV-tk基因在HeLa细胞内表达及抗肿瘤作用被引量：2
- 2014年
- 目的探讨应用四环素调控单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因在HeLa细胞内表达及抗肿瘤作用。方法将含有四环素阻遏蛋白基因的质粒载体pcDNA6/TR与含有四环素反应元件及HSV-tk基因的质粒载体pcDNA3.1-TetO2-TKI先后稳定转染HeLa细胞,给予不同浓度的四环素类似物强力霉素,应用RT-PCR检测细胞内HSV-tk基因表达,应用MTT法测定转染HSV-tk基因的HeLa细胞对不同浓度无氧鸟苷(GCV)杀伤的敏感性。结果转染两种质粒载体的HeLa细胞经不同浓度的强力霉素作用48h后,RT-PCR结果显示,随着强力霉素浓度的增大,HSV-tk基因表达量逐渐增加,强力霉素4μg/ml时,基因表达的水平达到高峰;加入强力霉素后,该细胞对GCV杀伤细胞的敏感性增加。结论本研究成功地应用四环素基因表达调控系统调控了HSV-tk基因在HeLa细胞内表达及杀伤肿瘤功能,为进一步探讨自杀基因杀伤肿瘤的可调控性提供理论基础。
- 王茜杜珍武马青山张桂珍
- 关键词：基因表达调控HSV-TK基因HELA细胞
- 四环素基因表达调控系统调控β-半乳糖苷酶基因在肝癌细胞中的表达被引量：2
- 2009年
- 目的:构建调控β-半乳糖苷酶(β-gal)基因表达的四环素基因表达调控载体,验证其在肝癌细胞内调控β-半乳糖苷酶基因的表达,为进一步利用该调控系统调控治疗基因治疗肝癌奠定实验基础。方法:根据2个四环素调控子结合位点(TetO2)基因与pcDNA3.1载体的基因核苷酸序列,设计引物,以pcDNA3.1载体为模板进行PCR。将具有串联2个四环素调控子结合位点(TetO2)基因的PCR产物连接入pcDNA3.1载体CMV启动子下游,构建成pcDNA3.1-TetO2载体,应用ABI3130测序仪利用pcDNA3.1-TetO2载体对TetO2PCR产物进行测序分析。再将β-gal克隆入pcDNA3.1-TetO2载体,构建成受四环素调控表达的β-半乳糖苷酶基因的表达载体pcDNA3.1-TetO2-β-gal。利用脂质体将携带四环素调控子基因(TR)的pcDNA6/TR载体转染到肝癌细胞HepG2中,利用杀稻瘟菌素进行细胞转染的稳定筛选,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TR基因在HepG2细胞内的表达。将pcDNA3.1-TetO2-β-gal载体转染到稳定表达pcDNA6/TR的HepG2细胞中,转染3～4d后,给予强力霉素(4mg.L-1),利用β半乳糖苷酶原位染色试剂盒染色,检测β-半乳糖苷酶基因的表达。结果:构建的pcDNA3.1-TetO2载体测序结果表明,串联2个四环素调控子结合位点(TetO2)基因片段插入到pcDNA3.1载体CMV启动子基因下游。pcDNA3.1-TetO2-β-gal载体酶切鉴定结果表明,β-gal成功地克隆入pcDNA3.1-TetO2载体。RT-PCR结果显示,TR基因在pcDNA6/TR转染的经杀稻瘟菌素筛选的HepG2细胞内得到稳定表达。给予强力霉素后,β-半乳糖苷酶基因在稳定转染TR基因的HepG2细胞内得以表达;而未给予强力霉素,β-半乳糖苷酶基因在稳定转染TR基因的HepG2细胞内表达受到抑制。结论:成功地构建了调控β-半乳糖苷酶基因表达的四环素基因表达调控载体,利用该载体成功地调控了β-半乳糖苷酶基因在HepG2细胞内的表达。
- 王茜杜珍武卜丽莎张桂珍
- 关键词：四环素基因表达调控Β-半乳糖苷酶基因HEPG2细胞
