铁道部科技基金(0003235016)
- 作品数：3 被引量：16H指数：3
- 相关作者：刘钟滨李佳陈惠清更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 烟曲霉菌热稳定性植酸酶在黑曲霉菌中的分泌性表达被引量：4
- 2007年
- 在先前克隆获得烟曲霉菌植酸酶phyA基因并构建了重组质粒的基础上,将该质粒转化黑曲霉菌pyrG基因缺陷株M54;同时制备植酸酶多克隆抗体用于植酸酶的免疫学检测。SDS-PAGE和western-blot结果表明,phyA在黑曲霉菌中获得分泌性表达。表达产物活性测定结果显示,重组植酸酶的表达量为597.6 IU/mL。在90℃加热10 min和100℃加热20 min后,重组植酸酶残余酶活分别为74%和70%,具有较好的热稳定性。实现了烟曲霉菌植酸酶在黑曲霉菌中的分泌性表达,表达产物具较高的生物活性和耐热性。
- 李佳刘钟滨
- 关键词：烟曲霉菌
- 原发性肾小球肾炎患者PBMC IL-18基因表达及其启动子区多态性分析被引量：3
- 2004年
- 为进一步探明原发性肾小球肾炎 (PGN )的发病机制 ,我们对IL 18基因表达及IL 18基因启动子区单核苷酸多态性(SNP )与PGN发病的关系进行了探讨。首先 ,分离 30例PGN患者与 12名正常人外周血单个核细胞 (PBMC ) ,分别提取RNA和DNA ,半定量RT PCR检测PBMCIL 18mRNA表达水平 ;PCR扩增IL 18启动子区序列并作双向DNA测序 ,检测SNP。结果发现 ,PGN患者PBMCIL 18mRNA表达较对照组显著升高 (P <0 0 0 1) ;IL 18启动子区 6 5 6T/G和 6 0 7A/C等位基因频率在PGN患者和正常对照组间均存在显著性差异 (P <0 0 5 ) ,137G/C未发现有显著性差异 (P >0 0 5 )。结果提示 ,IL 18启动子区SNP可能与IL 18的产生有关 。
- 陈惠清刘钟滨
- 关键词：原发性肾小球肾炎IL-18启动子单核苷酸多态性
- 耐热植酸酶基因phyA的克隆及新型表达载体的构建被引量：9
- 2004年
- 目的 克隆烟曲霉耐热植酸酶基因 ,构建分泌性的真核表达质粒 ,以获取耐热的基因工程植酸酶。方法 提取烟曲霉菌的基因组 ,以此为模板PCR扩增成熟肽编码序列 ,双酶切后与包含黑曲霉葡萄糖淀粉酶启动子和基因片断的真核表达载体 pYG 1 .2相连接 ,转化入大肠杆菌DH5α ,从转化菌株中提取质粒进行序列测定和分析。 结果 PCR扩增出 1 32 6bp的植酸酶编码序列 ,插入 pYG 1 .2质粒中 ,构建了重组质粒 ,重复实验结果表明 ,该植酸酶基因序列与已报道的烟曲霉植酸酶序列有 2个碱基的差异 ,编码的蛋白质序列有 99.8%的同源性。结论 成功构建了用于黑曲霉菌真核表达耐热植酸酶的重组质粒。
- 李佳刘钟滨
- 关键词：耐热植酸酶基因克隆
