黑龙江省普通高校骨干教师创新能力资助计划(2010td05)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关作者：钱爱东倪宏波姜海芳更多>>
- 相关机构：吉林农业大学黑龙江八一农垦大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省普通高校骨干教师创新能力资助计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 边缘无浆体MSP1α与MSP1β基因的克隆表达及其对牛红细胞的黏附特性
- 2013年
- 目的原核表达边缘无浆体(Anaplasma marginale,A.marginale)MSP1α和MSP1β蛋白,并检测其对牛红细胞的黏附作用。方法通过PCR法扩增MSP1α和MSP1β基因,插入表达载体pGEX-6p-1中,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组MSP1α和MSP1β蛋白经透析法纯化后,分别免疫新西兰白兔和商品蛋鸡,制备免疫兔血清及抗MSP1α和MSP1βIgY抗体,Western blot法分析其免疫原性,间接免疫荧光法(immunofluorescence assay,IFA)检测其在大肠埃希菌外膜上的表达,血凝试验(hemagglutination test,HA)和血凝抑制试验(hemagglutination inhibition test,HI)检测其对牛红细胞的黏附作用。结果重组表达质粒pGEX-6p-1-MSP1α和pGEX-6p-1-MSP1β经PCR、双酶切及测序证实构建正确;表达的重组MSP1α和MSP1β蛋白相对分子质量分别约为58 000和107 000,主要以包涵体形式存在,表达量分别占菌体总蛋白的31%和14%;纯化的重组MSP1α和MSP1β蛋白纯度分别可达93%和91%,可与免疫兔血清发生反应;抗MSP1α和MSP1βIgY抗体可分别与表达MSP1α和MSP1β蛋白的重组菌发生反应;重组MSP1α和MSP1β蛋白对牛红细胞具有明显的黏附作用,吸附率可达56.4%和52.7%。结论MSP1α和MSP1β基因可在大肠埃希菌外膜上大量表达,并对牛红细胞具有明显的吸附作用,为进一步揭示牛边缘无浆体病的作用机理奠定了基础。
- 倪宏波钱爱东姜海芳
- 关键词：边缘无浆体原核细胞
