国家自然科学基金(30800984)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：王永喻欢焦丽红王琪哈斯苏荣更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学内蒙古医科大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 表达绿色荧光蛋白的重组人偏肺病毒的构建及其中和抗体检测方法的应用被引量：1
- 2011年
- 人偏肺病毒(hMPV)是最新发现的与呼吸道疾病有关的病原体。为构建表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的B型重组hMPV,本研究利用反向遗传学技术,以表达EGFP的hMPV NL/1/99株全长cDNA质粒重组pPS-hMPV-EGFP,及其4种辅助重组质粒pCITE-N、pCITE-P、pCITE-L、pCITE-M2.1为基础,共转染BHK-21细胞进行重组病毒的拯救。鉴定结果表明拯救的重组病毒rhMPV-NL-EGFP高效表达外源基因EGFP。rhMPV-NL-EGFP与亲本病毒株具有相似的生物学特性,生长滴度可达106.7 TCID50/mL。rhMPV-NL-EGFP在细胞中连续传代10代仍然维持外源基因的高效和稳定表达,病毒滴度于室温条件下可维持长时间稳定。分别利用亲本病毒株和重组病毒rhMPV-NL-EGFP进行免疫小鼠血清中和抗体检测,结果显示两种方法具有较好的相似性(p>0.05)。本研究为病毒中和抗体的检测提供了更为快捷的新方法,同时为hMPV感染发病机制及疫苗研究奠定了基础。
- 李晓艳葛金英哈斯苏荣王琪焦丽红王永步志高
- 关键词：人偏肺病毒反向遗传技术病毒拯救绿色荧光蛋白
- 人偏肺病毒表面糖蛋白G的原核表达及哈尔滨某医院非呼吸道感染住院患者血清学检测被引量：1
- 2013年
- 目的构建人偏肺病毒(human metapneumovirus,hMPV)两种基因型的表面糖蛋白G基因原核表达体系,以成功表达的hMPV表面糖蛋白为基础,建立稳定有效的血清抗体检测方法。方法分别以hMPV两种基因型的G基因质粒为模版扩增目的片段,克隆到pBluescriptⅡPhagemid载体,测序后,将目的片段经双酶切后克隆到表达载体pET 32-a-(c+),诱导表达目的蛋白,作为包被抗原,用ELISA方法对106份血清样品进行检测。结果成功表达了hMPV两种基因型的表面糖蛋白G,并用此检测哈尔滨地区因非呼吸道感染住院患者血清样品106份,在不同年龄组中,抗hMPV-A型的血清阳性率分别为:≤10岁6.25%、10～20岁6.67%、20～40岁12.50%、40～60岁16.67%、>60岁21.74%;抗hMPV-B型的血清阳性率分别为:≤10岁12.50%、10～20岁6.67%、20～40岁18.75%、40～60岁22.22%、>60岁30.43%。结论成功表达了两种基因型hMPV的表面糖蛋白G,并建立了检测人血清抗体的ELISA方法。检测结果显示hMPV感染在哈尔滨地区人群中不少见,整体上来说,随着年龄的增加,血清抗体阳性率也是增高的。
- 喻欢赵景波武旭芳马玲王永
- 关键词：血清学实验酶联免疫吸附测定
