国家自然科学基金(30370723)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：陈凌江一平柯丹如刘志春李丽更多>>
- 相关机构：福建医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- EGFP-Cre重组酶真核表达重组质粒的构建及表达被引量：1
- 2007年
- 目的构建噬菌体P1Cre重组酶真核表达重组质粒,检测其在体外的表达情况和生物学活性。方法利用分子克隆技术,将cre编码序列克隆到真核表达质粒pIRES2-EGFP上,构建为重组质粒pCMV-Cre-EGFP。行菌液PCR、BamHⅠ酶切及测序鉴定,用FuGENE6介导转染293T细胞,应用荧光显微镜和流式细胞仪观察分析Cre重组酶的表达和重组效应。结果经菌液PCR、酶切及测序等鉴定分析,证实已将目的片段cre插入pIRES2-EGFP的多克隆位点上;建立Cre(+)组(pCMV-Cre-EGFP和含Loxp-CMV-RFP-Loxp的pCSilencer质粒)和Cre(-)组(pIRES2-EGFP和pCSilencer),转染293T细胞,48h后荧光显微镜下可见2组均表达绿色荧光和红色荧光,Cre(+)组的红色荧光少于Cre(-)组;流式细胞仪检测荧光蛋白表达率,统计学分析显示2组细胞的红色荧光蛋白表达率存在显著性差异(P<0.01)。结论成功构建噬菌体P1Cre重组酶表达重组质粒,并能在体外表达具有活性的Cre重组酶。
- 李丽陈凌柯丹如刘志春江一平
- 关键词：基因发光蛋白质类
