国家自然科学基金(39770345) 作品数:7 被引量:2 H指数:1 相关作者: 郜恒骏 朱红音 萧树东 顾伟齐 任卫平 更多>> 相关机构: 上海第二医科大学附属仁济医院 上海第二医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
重组人白细胞介素-2痘苗病毒的构建与鉴定 2001年 目的:构建表达人白细胞介素-2(hIL-2)的重组痘苗病毒,为肿瘤免疫基因治疗作必要准备。方法:应用分子克隆基因重组技术构建重组hIL-2痘苗病毒真核表达载体PMJ601(MJ601hlL-2)。在此基础上,应用分子病毒学同源重组技术构建能表达hIL-2的重组痘苗病毒(VMJ601hIL-2)。制备hIL-2探针,用DNA杂交技术鉴定VMJ601hIL-2,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测VMJ601hIL-2的基因产物。结果:成功构建了MJ601hIL-2和VMJ601hIL-2,VMJ601hIL-2感染的SGC7901胃癌细胞能分泌具有生物活性的hIL-2蛋白。结论:VMJ601hIL-2的构建与鉴定为进一步实施体内恶性肿瘤免疫基因治疗打下了坚实的基础。 郜恒骏 童菊芳 朱红音 顾伟齐 任卫平 萧树东关键词:白细胞介素2 痘苗病毒 免疫疗法 胃癌 痘苗病毒真核表达载体pM J601的转化与鉴定 2000年 目的 对痘苗病毒表达载体 p MJ6 0 1进行转化与鉴定 ,为进一步实施痘苗病毒为载体的基因治疗作必要的准备。方法 利用感受态细胞的制备及转化、质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶酶切等多种基因工程技术对质粒 p MJ6 0 1进行转化及鉴定。结果 琼脂糖凝胶电泳清楚地显示了 p MJ6 0 1质粒 3条带和 Bam HI或 H ind 酶切后的线性条带。结论 痘苗病毒表达载体 p MJ6 0 1的转化与鉴定 ,为痘苗病毒载体系统的基因治疗打下了坚实的基础。 郜恒骏 朱红音 楼屹 顾伟齐 房静远 任卫平 萧树东关键词:痘苗病毒 基因工程 真核 重组人白细胞介素-2基因痘苗病毒真核表达载体的构建与鉴定 被引量:2 2000年 目的:构建含人白细胞介素-2(hIL-2)基因的痘菌病毒真核表达载体pMJ601,为进一步实施胃癌的基因治疗作必要准备。方法:利用质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、酶切、目的基因与载体的连接、感受态细胞的制备及转化和DNA序列分析等多种基因工程技术,将纯化回收的hIL-2基因分别与质粒pBluescriptⅡSK+/-及pMJ601进行连接、转化并签定。结果:克隆有hIL-2基因的pLXSN经EcoRI-BamHI酶切后,hIL-2基因被成功地连接到质粒pBluescriptⅡSK+/-上,再经Sail-BamHI酶切后,hIL-2基因又被克隆到pMJ601真核表达载体上。结论:重组hIL-2基因痘苗病毒真核表达载体pMJ601的构建为胃癌的免疫基因治疗打下了坚实的基础。 郜恒骏 朱红音 顾伟齐 楼屹 任卫平 萧树东关键词:重组人白细胞介素2 痘苗病毒 真核表达载体 胃癌 基因治疗 重组单纯疱疹病毒-胸苷激酶和人白介素-2基因痘苗病毒真核表达载体的构建 2001年 目的 构建含单纯疱疹病毒 胸苷激酶 (HSV tk)和人白介素 2 (hIL 2 )基因的痘苗病毒真核表达载体 pMJ6 0 1,为进一步实施胃癌的基因治疗作必要的准备。 方法 利用目的基因与载体的连接、感受态细胞的制备及转化、质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、酶切、DNA序列分析等多种基因工程技术 ,将纯化回收的HSV tk和hIL 2分别与 pMJ6 0 1进行连接、转化并鉴定。 结果 分别用BamHⅠ HindⅢ和SalⅠ BamHⅠ酶切位点 ,将HSV tk与hIL 2DNA成功地克隆到pMJ6 0 1真核表达载体上。结论 重组HSV tk +hIL 2基因 pMJ6 0 1的构建 ,为进一步研究胃癌的基因治疗打下坚实的基础。 郜恒骏 朱红音 顾伟齐 楼屹 任卫平 萧树东关键词:单纯疱疹病毒-胸苷激酶 白介素-2 痘苗病毒 基因治疗 真核表达载体 重组IL-2痘苗病毒表达载体pMJ601的构建与鉴定 2000年 郜恒骏 楼屹 朱红音 顾伟齐 房静远 任卫平 萧树东关键词:胃癌 基因治疗 表达HSV-TK痘苗病毒真核表达载体pMJ601的构建与鉴定 2002年 目的:构建含自杀基因(HSV-TK)的痘苗病毒真核表达载体pMJ601,为进一步实施胃癌的基因治疗作必要准 备。方法:利用目的基因与载体的连接、感受态细胞的制备及转化、质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、酶切等多种基因工 程技术将胶纯化回收的HSV-TK与pMJ601进行连接、转化及鉴定。结果:克隆在X-pPNT质粒上的HSV-TK DNA 成功地被克隆到经BamHⅠ-HindⅢ双酶切的pMJ601载体上。结论:重组HSV-TK痘苗病毒真核表达载体pMJ601 的构建,为胃癌自杀基因的基因治疗打下坚实的基础。 郜恒骏 朱红音 顾伟齐 搂屹 任卫平 萧树东关键词:自杀基因 基因治疗 重组人白介素-2痘苗病毒对MKN45胃癌细胞感染性及白介素-2蛋白表达 2001年 目的 体外研究表达人白介素 2 (hIL 2 )的重组痘苗病毒 (vacciniavirus ,VV)对MKN45胃癌细胞的作用。方法 应用分子病毒学同源重组技术构建能表达hIL 2的重组VV(VMJ6 0 1hIL 2 )。用DNA杂交技术鉴定VMJ6 0 1hIL 2 ,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)检测VMJ6 0 1hIL 2基因产物。用VMJ6 0 1hIL 2体外感染MKN45胃癌细胞株 ,探讨其对体外胃癌细胞的作用。结果 VMJ6 0 1hIL 2对体外MKN45胃癌细胞株有较强的感染性 ,VMJ6 0 1hIL 2感染的MKN45胃癌细胞能分泌具有生物活性的hIL 2蛋白。结论 VMJ6 0 1hIL 2的构建与鉴定 ,进一步为胃癌的免疫基因治疗打下了坚实的基础。 郜恒骏 朱红音 童菊芳 顾伟齐 任卫平 萧树东关键词:白介素-2 痘苗病毒 胃癌 蛋白表达 免疫疗法