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国家自然科学基金(3037134-3)
作品数:
1
被引量:2
H指数:1
相关作者:
鲁杰
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韩继生
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2008
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小干扰RNA在心肌细胞中对柯萨奇病毒B3复制的抑制作用研究
被引量:2
2008年
目的通过在原代心肌细胞培养上研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)介导的基因干扰对病毒增殖的抑制和细胞内免疫清除作用,评价siRNA在治疗病毒性感染中的可能性。方法体外制备BALB/c乳鼠心肌细胞,利用脂质体和电穿孔转染方法转染siRNA后感染病毒,流式细胞术、中性红染色和病毒致细胞病变作用(CPE)保护实验评价转染效率和细胞生长状态,空斑形成减少实验、RT-PCR等方法检测抑制病毒程度。结果通过在HeLa细胞上的筛选,针对病毒不同区域的siRNA呈现出不同的抗病毒作用,靶序列位于2B区的siRNA-3753能显著抑制柯萨奇病毒B3(CVB3)感染。在原代培养的心肌细胞中,转染siRNA-3753后同样显示出很好的抗病毒效果,心肌的搏动、心肌细胞的生长状况保持着较好的状态。而病毒对照和非特异性siRNA-non感染24h后,细胞停止搏动,逐步变圆,皱缩死亡。测定培养上清和细胞内的病毒滴度,电转siRNA-3753对病毒抑制率可以达到98.1%,脂质体转染siRNA-3753对病毒抑制率为78.2%。电穿孔转染效率可以达到56.03%,脂质体为9.0%。结论针对CVB3基因组2B区的siRNA在保护心肌细胞抵抗CVB3病毒感染实验中具有抑制病毒复制作用。
刘哲伟
任红雁
姚海兰
肖宗慧
鲁杰
何峰
韩继生
关键词:
小干扰RNA
病毒性心肌炎
心肌细胞
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