国家自然科学基金(30360097)
- 作品数：7 被引量：16H指数：4
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- 相关机构：新疆医科大学新疆医科大学第一附属医院更多>>
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- 泡球蚴Em18抗原基因的分段表达及抗原表位的初步分析被引量：1
- 2013年
- 目的构建截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的重组蛋白并对其进行初步鉴定。方法采用DNAman软件设计引物,聚合酶链式反应(PCR)法扩增并构建截短的pET41a-Em18.4原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18.4-GST重组蛋白,采用SDS-PAGE电泳及蛋白免疫印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测对其进行初步鉴定。结果成功构建出截短的pET41a-Em18.4,SDS-PAGE检测表明rEm18.4-GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为41KDa处有表达条带。但蛋白免疫印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测结果显示rEm18.4-GST重组蛋白不能与AE患者阳性血清反应。结论成功构建出截短的pET41a-Em18.4原核表达质粒并表达的rEm18.4-GST重组蛋白,但其缺乏抗原性,可能与Em18的空间构象有关。
- 张蓓杨晨晨蔡雯孙玉萍陈锋林仁勇
- 关键词：泡球蚴抗原表位
- 3种截短的泡球蚴Em18基因原核表达质粒的构建、表达及鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的构建3种截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的3种重组蛋白,并对其进行初步鉴定。方法DNAman软件设计引物,PCR法扩增并构建3种截短的pET41a-Em18.1、Em18.2和Em18.3原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性;IPTG诱导、表达和纯化rEm18.1-GST、rEm18.2-GST和rEm18.3-GST重组蛋白,SDS-PAGE电泳及Western blot进行初步鉴定。结果成功构建了3种截短的pET41a-Em18.1、Em18.2和Em18.3重组表达质粒;SDS-PAGE检测表明rEm18.1-GST、rEm18.2-GST、rEm18.3-GST重组蛋白得到成功表达,在分子质量单位为41、45.5和45.5ku处有表达条带;Western blot显示3种重组蛋白均能被AE病人血清识别。结论成功构建了截短的pET41a-Em18.1、pET41a-Em18.2和pET41a-Em18.3原核表达质粒,表达的3种重组蛋白均具有良好的抗原性,为Em18抗原表位分析奠定了基础。
- 张春桃林仁勇王俊芳王星王俨卢晓梅张静萍张琰张彤温浩
- 关键词：泡球蚴免疫检测
- Em18.3重组蛋白的表达及其免疫诊断特性的研究被引量：7
- 2007年
- 目的:在大肠杆菌中表达和纯化截短的泡球蚴rEm18.3抗原重组蛋白,对其免疫诊断特性进行鉴定。方法:IPTG诱导pET41a-Em18.3原核表达质粒,表达和纯化rEm18.3-GST重组蛋白,SDS-PAGE电泳及West-ern blot法对其进行初步鉴定,ELISA法确定其免疫诊断特性。结果:rEm18.3-GST重组蛋白得到成功表达,SDS-PAGE电泳显示相对分子量为45kDa。Western blot结果表明,rEm18.3-GST重组蛋白能被AE病人阳性血清识别。对56例多房棘球蚴病(AE)、88例细粒棘球蚴病(CE)、24例其他寄生虫病、24例其他疾病和24例健康者共236份血清进行ELISA检测结果显示,对AE血清诊断的敏感性为10.7%,特异性为99.4%,阳性预测值85.7%,阴性预测值78.1%。结论:rEm18.3-GST免疫诊断价值较低,Em18抗原重要的表位可能位于1-40位氨基酸。
- 林仁勇张春桃温浩王俊芳王星王俨卢晓梅张静萍张琰无
- 关键词：泡球蚴免疫检测
- 抗泡球蚴重组Em18抗原多克隆抗体的纯化与鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的:制备抗泡球蚴18(Em18)抗原多克隆抗体,纯化并鉴定。方法:表达并纯化rEm18-GST蛋白。用纯化后的蛋白作为免疫原,免疫新西兰白兔获得抗rEm18-GST的多克隆抗体IgG,采用ELISA法检测抗体效价,进一步纯化抗体,获得抗Em18特异性多克隆抗体IgG,用Western blot及ELISA法检测并进行初步鉴定。结果:免疫制备获得兔抗rEm18-GST抗体,随着免疫次数的增加,抗体滴度不断升高,于第10周达到最高。ELISA检测抗体效价为1∶51200。Western blot及ELISA法鉴定表明Em18-GST抗体去除了与GST的交叉反应。结论:获得了去除与GST交叉反应的抗Em18多克隆抗体,为进行噬菌体肽库筛选奠定基础。
- 杨晨晨张蓓王俊芳张春桃王俨许晏王星张静萍张琰温浩林仁勇
- 关键词：泡球蚴多克隆抗体纯化
- 应用噬菌体7肽库筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位的初步研究被引量：2
- 2007年
- 目的:从噬菌体7肽库中筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位,为研究和开发新的包虫病诊断抗原提供实验依据。方法:用纯化后的rEm18-GST免疫新西兰白兔,获得抗rEm18-GST的多克隆抗体,进一步纯化,获得抗Em18多克隆抗体IgG,以之作为靶分子,免疫筛选噬菌体随机7肽库。经过5轮的淘筛过程,随机挑取9个蓝色噬菌斑扩增,核苷酸序列测定分析并与Em18进行同源性比较。结果:经5轮筛选后,阳性克隆得到富集,9个噬菌体克隆的氨基酸序列与Em18无同源性。结论:所得肽段可能是Em18抗原模拟表位。
- 张蓓杨晨晨林仁勇王俊芳张春桃王俨卢晓梅张静萍张琰许晏温浩
- 关键词：噬菌体肽库模拟表位
- 截短的泡球蚴Em18基因原核表达质粒的构建、表达及鉴定被引量：5
- 2006年
- 目的:构建截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的重组蛋白,并对其进行初步鉴定。方法:DNAman软件设计引物,PCR法扩增并构建截短的pET41a-Em18．1原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18．1-GST重组蛋白,采用SDS-PAGE 电泳及Western免疫印迹法对其进行初步鉴定。结果:成功构建出截短的pET41a-Em18．1,SDS-PAGE检测表明rEm18．1-GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为41 kDa处有表达条带。Western blot结果显示 rEm18．1-GST重组蛋白能被AE病人阳性血清识别。结论:截短的pET41a-Em18．1原核表达质粒表达的 rEm18．1-GST重组蛋白具有良好的抗原性,为Em18抗原表位的分析奠定基础。
- 张春桃林仁勇王俊芳王星王俨卢晓梅张静萍张琰张彤温浩
- 关键词：泡球蚴重组蛋白
- 两种克隆方法在3种截短的泡球蚴Em18原核表达载体构建中的比较
- 2006年
- 目的比较3种截短的泡球蚴Em18基因聚合酶链反应(PCR)扩增产物经TA克隆和直接酶切2种方法,在原核表达质粒构建中的运用。方法PCR扩增带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的3种截短的泡球蚴Em18基因,经2种方法构建3种截短的Em18原核表达质粒：①PCR扩增产物与T载体连接构建T-Em18,重组质粒经EcoRⅠ/XhoⅠ酶切,电泳分离、纯化目的片段,再与经过EcoRⅠ/XhoⅠ酶切的原核表达载体pET41a(+)连接；②PCR扩增产物经EcoRⅠ和XhoⅠ酶切,电泳、纯化,直接与经过相同限制性内切酶酶切的pET41a(+)连接。结果先经TA克隆,再经酶切构建3种截短的泡球蚴Em18原核表达载体获得成功。而采用直接酶切PCR扩增产物的构建方法未获得成功。结论TA克隆可用于对直接酶切效果不好的PCR扩增片段与表达载体的连接构建,方法简便高效,可提高带有限制性酶切位点的PCR扩增片段克隆人原核表达载体的效率。
- 张春桃王俊芳林仁勇张彤王星卢晓梅王俨张琰温浩
- 关键词：克隆分子DNA质粒
