公共文化服务平台

共 6 条记录，以下是 1-7

全选清除导出

排序方式：

刚地弓形虫绿色荧光蛋白突变株的构建被引量：2: 2011年; 目的构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的弓形虫突变株,探讨以其检测宿主细胞感染率的效果。方法在人子宫颈癌(HeLa)细胞中培养弓形虫RH株速殖子,电穿孔法向虫体导入质粒ptubP30-GFP/sag-CAT,氯霉素和极限稀释法筛选稳定表达P30-GFP融合蛋白的突变株,RT-PCR法和荧光显微镜检测GFP蛋白在虫体内的表达。HeLa细胞分别感染1×104～1×107个突变株虫体,24 h后,显微镜计数各孔10个高倍镜视野下具有GFP荧光的HeLa细胞数。流式细胞仪检测"纳虫泡",评估HeLa细胞感染率。结果导入ptubP30-GFP/sag-CAT质粒后,经氯霉素筛选获得阳性克隆。RT-PCR检出虫体GFP基因表达,镜下可见GFP荧光聚集于虫体外膜。HeLa细胞感染率随虫体接种量的增多而增加,接种1×104～1×107个虫体24 h后,具有GFP荧光的HeLa细胞数分别为(14±6)、(133±45)、(332±93)和(443±90)个;流式细胞仪检测HeLa细胞感染率分别为(0.49±0.09)%、(8.76±0.50)%、(21.02±1.49)%和(39.00±3.47)%。结论构建了刚地弓形虫GFP荧光蛋白突变株,为检测虫体在宿主细胞内的增殖提供了新途径。; 吴亮袁异玮姜旭淦傅行礼逯兆喜涂国华李礼陈盛霞周红; 关键词：弓形虫突变株绿色荧光蛋白荧光显微镜流式细胞仪

基于hxgprt^-缺陷的弓形虫顶质体荧光突变株的构建被引量：1: 2012年; 目的:构建绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记顶质体的弓形虫突变株,建立检测顶质体的简便方法。方法:扩增顶质体酰基载体蛋白(acyl carrier protein,ACP)基因并构建转染载体pHX-ACP-GFP,转入弓形虫hxgprt-株速殖子,经霉酚酸和黄嘌呤筛选荧光突变株。激光共聚焦显微镜和蛋白质印迹技术检测突变株ACP-GFP融合蛋白的表达。结果:通过霉酚酸和黄嘌呤筛选,可以在1周内获得突变株。激光共聚焦显微镜下观察到ACP-GFP融合蛋白聚集于顶质体,用抗GFP抗体能检测出ACP的转运肽型和成熟型蛋白。结论:顶质体荧光突变株可清晰标记出顶质体的位置,借助GFP标签即可检测融合蛋白的表达。; 吴亮姜旭淦李礼鞠爱萍沈进傅行礼陈盛霞周红; 关键词：弓形虫突变株绿色荧光蛋白

刚地弓形虫绿色荧光蛋白突变株的研究: 目的:构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的弓形虫突变株,探讨通过虫体荧光检测宿主细胞感染率的方法。方法:HeLa细胞中培养弓形虫RH株速殖子,待虫体涨破细胞后离心收集虫...; 吴亮姜旭淦傅行礼逯兆喜涂国华李礼陈盛霞; 关键词：弓形虫突变株绿色荧光蛋白荧光显微镜流式细胞仪; 文献传递

弓形虫速殖子感染对HeLa细胞凋亡的影响被引量：1: 2014年; 目的:探讨不同数量弓形虫速殖子感染对HeLa细胞凋亡的影响。方法:24孔板培养HeLa细胞16 h,各孔接种不同数量弓形虫速殖子继续培养4 h,在培养液中加入终质量浓度为0.5μg/mL放线菌素D诱导凋亡,于加放线菌素D后8、12、24、36 h收集细胞,采用Hoechst 33258染色法和Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率。结果:当虫体量/细胞量(MOI)≤1时,弓形虫感染表现为抑制放线菌素D诱导的HeLa细胞凋亡;随着虫体数量增加(MOI>1)和感染时间延长(≥24 h),虫体感染则表现为促进HeLa细胞凋亡。结论:弓形虫感染可影响体外培养的HeLa细胞的凋亡,影响程度与感染虫体数量相关。; 沈进陈颖婷吴亮吴腊梅王晓陈盛霞曹建平; 关键词：刚地弓形虫细胞凋亡 HELA细胞放线菌素D

用四环素诱导调控表达系统构建弓形虫脂肪酸合成酶FABZ缺陷株被引量：2: 2014年; 目的构建基于四环素诱导调控表达系统的刚地弓形虫β-酮脂酰ACP合成酶(FABZ)缺陷株。方法从弓形虫基因组中扩增fabz基因并构建四环素调控诱导表达载体pTetO7-Sag1-FABZ-Ty-DHFR,电穿孔法导入弓形虫TATi株,通过乙胺嘧啶抗性和极限稀释法筛选FABZ缺陷株,蛋白质印迹(Western blotting)检测虫体内附加表位标签Ty的表达。在5×105个FABZ缺陷株弓形虫速殖子培养液中加入脱水四环素(终浓度为1μg/ml),Western blotting检测带有Ty标签的FABZ表达情况。结果筛选获得的缺陷株可表达带有Ty标签的转运肽型FABZ和成熟型FABZ。FABZ缺陷株弓形虫速殖子培养液中加入脱水四环素24 h和48 h后,转运肽型FABZ表达量均较对照组显著降低(P<0.05)。结论构建了由脱水四环素调控表达的弓形虫FABZ缺陷株。; 吴亮薛兰兰王晓吴腊梅姜旭淦陈盛霞; 关键词：刚地弓形虫

弓形虫β-酮脂酰ACP合成酶的表达及鉴定: 2012年; 目的构建刚地弓形虫β-酮脂酰ACP合成酶(FABZ)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,建立检测和定位虫体FABZ蛋白表达的方法。方法运用RT-PCR技术扩增弓形虫RH株速殖子fabz基因,克隆至pET32a(+)载体,在大肠杆菌Rosetta中诱导表达。Ni-NTA亲合层析柱纯化重组FABZ蛋白并制备其兔多克隆抗体。采用免疫印迹(Western blotting)技术和间接免疫荧光技术(IFA)检测和定位FABZ在虫体内表达。结果成功表达重组FABZ蛋白,并制备其多克隆抗体。Western blotting技术检测出虫体转运肽型FABZ蛋白(t-FABZ)和成熟型FABZ蛋白(m-FABZ),IFA技术检测出分布于核周内质网和顶质体的FABZ蛋白。结论通过制备多克隆抗体,用Western blotting技术和IFA技术能检测和定位FABZ蛋白在虫体内表达,该方法在顶质体蛋白研究中具有较高的应用价值。; 吴亮姜旭淦李礼鞠爱萍傅行礼陈盛霞周红; 关键词：弓形虫原核表达

弓形虫棒状体蛋白18的原核表达及鉴定被引量：5: 2013年; 目的:原核表达刚地弓形虫RH株棒状体蛋白(rhoptry proteins,ROPs)18,建立检测和定位虫体ROP18蛋白的方法。方法:运用PCR技术扩增弓形虫RH株速殖子ROP18基因,克隆至pET-28a(+)载体,转化至大肠埃希菌Rosetta中诱导表达,经KCl染色切胶纯化重组ROP18蛋白,并制备其兔多克隆抗体。采用蛋白质印迹技术和间接免疫荧光技术(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测和定位ROP18在弓形虫速殖子体内的表达。结果:成功表达重组ROP18蛋白,并获得其多克隆抗体。经蛋白质印迹技术检测出虫体ROP18特异性条带,IFA技术检测出ROP18分布于虫体棒状体。结论:通过制备多克隆抗体,利用蛋白质印迹技术和IFA技术能检测和定位ROP18蛋白在弓形虫体内表达。; 鞠爱萍吴亮沈进李礼姜旭淦陈盛霞; 关键词：弓形虫原核表达

全选清除导出

共1页<1>

江苏省普通高校研究生科研创新计划项目(CX10B282Z)