山东省自然科学基金(Y2006C04)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
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- G250抗原肽与HBcAg融合基因原核表达载体的构建及表达蛋白的免疫分析被引量：1
- 2014年
- 目的构建肾癌G250抗原肽与HBcAg重组基因的原核表达质粒pET28a(+)/C-G250肽-C,并通过大肠杆菌进行原核表达并纯化,分析表达融合蛋白的免疫原性及抗原性。方法 PCR扩增编码G250抗原中249～268氨基酸的基因片段,将G250肽插入去除主要免疫优势区的重组质粒pGEMEX/HBcAg中,获得重组质粒pGEMEX/C-G250肽-C,为更换酶切位点,以pGEMEX/C-G250肽-C为模板,PCR扩增C-G250肽-C基因片段,最终将目的基因亚克隆入原核表达质粒pET28a(+)中,IPTG诱导融合蛋白表达,利用Ni 2+-NTA亲和层析法纯化重组融合蛋白,SDSPAGE鉴定融合蛋白的表达,纯化后融合蛋白经腹腔注射免疫BALB/c小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗体的滴度。结果酶切及基因测序鉴定证实融合基因正确重组于表达质粒pET28a(+)中,原核表达并纯化后,该分离纯化融合蛋白纯度达95%以上,其相对分子质量约为22.35。BALB/c小鼠经4次免疫后,所有小鼠血清中均可检测到抗体,免疫第6周其血清中抗体滴度可达到1∶5.12×105,抗G250肽抗体滴度达到1∶6.4×104,抗HBcAg抗体滴度不超过1∶4×103。结论成功构建肾癌G250抗原肽与HBcAg重组基因原核表达质粒pET28a(+)/C-G250肽-C,在大肠杆菌中可高效表达,纯化后融合蛋白具有较强的免疫原性,能诱导小鼠产生高滴度和高特异性的抗体。
- 刘波孙泽强刘庆勇陈杰王司军杨广笑王全颖
- 关键词：G250HBCAG
- NT4-TAT-6×His-VHLβ结构域肾癌抑制融合肽cDNA克隆的构建被引量：2
- 2009年
- 目的构建VHL蛋白(von Hippel-Lindau protein,pVHL)β结构域肾癌抑制融合肽cDNA,并将其应用于肾癌的微基因治疗。方法分别设计合成pVHLβ结构域104-123短肽cDNA的正向和反向引物以及编码TAT-6×His cD-NA的正、反向引物,使用互为引物模板PCR方法,扩增获得具有NaeI/Eco72I酶识别位点的TAT-6×His cDNA片段和具有Eco72I/BamH I酶识别位点的VHLβ抑制肽cDNA片段,将两个片段分别克隆到pGEM-T easy中,使用双脱氧终止法测序,通过DNASIS软件分析同数据库资料一致性和编码的氨基酸序列。用NaeI和BamH I双酶切获取的TAT-6×His-VHLβcDNA片段插入到具有NT4信号肽的pBV220载体中,构建了pBV220-NT4-TAT-6×His-VHLβ质粒。结果经DNA测序证实,获得了编码TAT-6×His cDNA片段和编码VHLβ抑制肽的cDNA片段,分析证实核酸序列和推导的氨基酸同数据库资料一致。重组质粒pBV220-NT4-TAT-6×His-VHLβ酶切图谱证实已将NT4-TAT-6×His-VHLβ融合肽cDNA克隆到pBV220原核表达载体中。结论成功扩增了编码TAT膜渗透肽和6×His标签肽以及VHL抑癌基因β结构域肾癌抑制肽的cDNA片段,构建了具有NT4信号肽的TAT-6×His-VHLβ融合肽cDNA。
- 陈杰刘庆勇阮喜云张士宝张建军李宗武杨广笑王全颖
- 关键词：融合肽微基因
- 分泌表达肾癌抑制融合肽的重组腺伴随病毒对肾癌移植瘤的疗效
- 2013年
- 目的观察分泌表达NT4-TAT-6×His-VHLβ肾癌抑制融合肽的重组腺伴随病毒作用于肾癌鸡胚移植瘤的疗效。方法将人肾癌细胞系RLC-310接种到鸡胚绒毛尿囊膜上。选取成瘤较好鸡胚,分别用rAAV/NT4-TAT-6×His-VHLβ(A组)、空病毒(B组)、PBS缓冲液(C组)进行干预,观察移植瘤生长及各组移植瘤的大小,采用HE染色及免疫荧光法比较各组的作用效果。结果 A组移植瘤生长速度明显慢于其他两组;A组移植瘤体积与B、C两组比较差异有统计学意义(P<0.05);HE染色结果显示,A组鸡胚移植瘤生长受到抑制;荧光显微镜可观察到A组荧光明亮(++),对照组未观察到荧光(-)。结论 rAAV/NT4-TAT-6×His-VHLβ对肾癌鸡胚移植瘤有抗肿瘤效应,为肾癌的基因治疗研究提供了一种新的途径。
- 张斌陈杰刘雁张士宝刘双庆刘波王全颖杨广笑刘庆勇
- 关键词：鸡胚绒毛尿囊膜融合肽
- 人肾癌鸡胚模型的建立及其肿瘤生物学特性的研究被引量：7
- 2012年
- 目的建立人肾癌鸡胚模型,探讨其形态及生物学特性。方法将肾癌细胞系RLC-310接种于鸡胚绒毛尿囊膜,观察影响肾癌鸡胚移植瘤成活的因素、移植瘤生长特性、形态学特征和生物学性状。结果成功建立了人肾癌鸡胚移植瘤模型;移植瘤易于生长并具有较强的血管诱导作用;光镜下移植瘤具有与人肾癌类似的组织结构。结论该模型容易建立,能动态观察肾癌诱导血管生成的全过程,可用于肾癌的实验研究。
- 张斌阮喜云陈杰张士宝刘双庆王全颖杨广笑刘庆勇
- 关键词：肾癌鸡胚绒毛尿囊膜动物模型血管生成
