国家高技术研究发展计划(2006AA02Z496)
- 作品数：20 被引量：46H指数：3
- 相关作者：仲人前邓安梅蒋廷旺熊怡淞李畅更多>>
- 相关机构：第二军医大学上海市东方医院常熟市第二人民医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CFSE标记结合流式细胞术检测单核细胞Siglec-1刺激CD4^+/CD8^+T细胞增殖
- 2011年
- 目的建立CFSE标记结合流式细胞术检测T淋巴细胞增殖的方法,并探讨其在研究单核细胞唾液酸黏附素(Si-glec-1)对CD4+/CD8+T细胞增殖中的应用。方法免疫磁珠分离冠状动脉综合征(ACS)患者和健康对照者外周血CD14+单核细胞,与经CFSE标记的第三方健康献血者CD4+/CD8+T细胞共培养5 d,流式细胞术检测T淋巴细胞增殖情况。结果 ACS患者CD14+单核细胞具有比健康人单核细胞更强的刺激CD4+/CD8+T淋巴细胞增殖能力;当用干扰素-α(INF-α)刺激增强正常单核细胞Siglec-1表达后,其刺激T细胞增殖能力增强;用单抗阻断单核细胞Siglec-1后,其刺激T细胞增殖能力减弱。结论 ACS患者增强的CD4+/CD8+T淋巴细胞增殖能力部分是由于激活的单核细胞高表达Siglec-1引起。
- 熊怡淞俞娟孙懿李畅仲人前
- 关键词：流式细胞术细胞增殖
- BAFF及其受体在原发性胆汁性肝硬化小鼠中的表达及临床意义
- 2009年
- 陈军唐裕杰吴传勇蒋廷旺邓安梅仲人前
- 关键词：原发性胆汁性肝硬化BAFF小鼠受体非化脓性炎症免疫系统异常
- 中西医结合治疗原发性胆汁性肝硬化小鼠疗效分析被引量：2
- 2009年
- 探讨熊去氧胆酸(UDCA)和"一贯煎"在原发性胆汁性肝硬化小鼠中的疗效。对polyI∶C注射的C57BL/6雌性小鼠分别给予UDCA、"一贯煎"和两种药物联合治疗,分析不同药物治疗组血清ALP、-γGT的变化,实时荧光定量RT-PCR方法检测脾脏单个核细胞BCMA mRNA的表达,并分析肝门管区单个核细胞浸润率。结果表明,PBC模型鼠肝门管区单个核细胞浸润率、脾脏单个核细胞BCMA mRNA的表达较正常小鼠明显增加(P<0.05);不同治疗组较模型对照组ALP、-γGT显著下降(P<0.05),"一贯煎"或联合治疗还能减少肝门管区单个核细胞浸润率、下调脾脏单个核细胞BCMAmRNA和ALP。"一贯煎"或联合熊去氧胆酸治疗PBC小鼠疗效更好,为以后中西医联合治疗PBC提供了理论依据和技术支持。
- 唐裕杰吴传勇蒋廷旺谷明莉陈燕周晔韩志君邓安梅仲人前
- 关键词：B细胞成熟抗原原发性胆汁性肝硬化熊去氧胆酸一贯煎
- 人源化抗体的演进发展及应用现状被引量：2
- 2009年
- 抗体的制备在经历了多克隆抗体、单克隆抗体后,进入了以人源化为目标的基因工程抗体阶段。嵌合抗体(chime ricantibody)属于第一代人源化抗体,是应用DNA重组技术将鼠源性的可变区(V区)基因与人抗体的恒定区(C区)基因相连接构成嵌合基因的表达产物。在此基础上产生的第二代人源化抗体,即CDR移植抗体(CDR-grafted antibody),仅保留了3个CDR是鼠源性的,人源性可达90%以上。以上两者仍保留了鼠源性的成分,可诱发人抗鼠抗体(HAMA)反应。20世纪90年代以后产生的噬菌体抗体库技术,融合了噬菌体展示和抗体组合文库技术,突出了基因型与表型的统一,使抗体工程技术进入了一个新的发展阶段,全人源化抗体的生产和应用逐渐走向成熟。人源化抗体在肿瘤、器官移植排斥反应、自身免疫病等疾病的临床诊断和治疗中显示出了广阔的应用前景。
- 吴炜霖仲人前
- 关键词：人源化抗体噬菌体展示技术
- 原发性胆汁性肝硬化模型中淋巴细胞增殖及活化诱导凋亡机制研究被引量：1
- 2010年
- 目的通过检测原发性胆汁性肝硬化（PBC）动物模型肝脏和脾脏淋巴细胞增殖及活化诱导凋亡（AICD），了解PBC模型小鼠的免疫耐受情况。方法聚肌苷酸胞嘧啶核苷酸（polyI：C）5mg／kg剂量注射C57BL／6小鼠建立PBC模型，分离肝、脾淋巴细胞并纯化CD4^＋T淋巴细胞，然后以M2蛋白及刀豆蛋白A（ConA）结合抗-CD3刺激细胞增殖及AICD，定量PCR和免疫印迹技术检测凋亡相关基因及信号蛋白。结果①M2蛋白刺激后，空白对照组和PBS组的细胞增殖能力（分别为0．1988±0．0111和0．2068±0．0115）差异无统计学意义（P〉0．05），但是PBC组小鼠细胞增殖能力（0．358±0．022）与以上两组相比显著增强，且PBC组小鼠肝内淋巴细胞增殖能力强于脾淋巴细胞（P〈0．01）。②空白对照组和PBS组之间AICD情况差异无统计学意义（74．70％±4．58％比74．20％±4．44％，P〉0．05），但均显著高于PBC组（44．85％±6．47％，P〈0．01），同时PBC组小鼠肝内CD4^＋T细胞的凋亡率显著低于脾脏（P〈0．01）。③PBC组小鼠肝脾淋巴细胞FasL、TRAIL基因的表达较PBS组均明显降低（P〈0．01），而Fas表达无明显改变。④PBC组小鼠CD4^＋T细胞长构型Fas相关死亡区域样白细胞介素-1G转化酶抑制蛋白（FLIPL）表达明显升高，且肝内T细胞表达较脾脏显著增加（P〈0．01）。结论FLIPL表达增高可能是AICD受到抑制的重要原因，同时FasL和TRAIL mRNA表达降低可能也起到一定的作用。
- 蒋廷旺熊怀民盛建华龚燕萍沈艳红陆建文许国华邓安梅仲人前
- 关键词：原发性胆汁性肝硬化凋亡免疫耐受
- B淋巴细胞刺激因子及其受体与多发性骨髓瘤关联性的临床实验诊断研究被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨B细胞激活因子(BLyS)及其受体在多发性骨髓瘤(MM)发病中的作用机制。方法:用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR),对19例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞(PBMCs)中BLyS及其受体mRNA含量进行检测;并比较MM患者血清BLyS含量与外周血BLyS及其受体基因表达水平和免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)、轻链(kap、lam)的相关性。结果:MM患者血清BLyS含量[(7.95±4.93)g/L]明显高于健康对照组[(2.70±1.09)g/L,P<0.01],并与LDH浓度呈正相关性(r=0.734,P<0.001);97.4%(18/19),84.2%(16/19)的MM患者PBMCs中BLyS、BCMA mRNA表达水平较正常人明显增高,并且也与LDH的含量呈正相关;而47.32%(9/19)患者TACI mRNA表达水平降低。结论:MM患者的血清BLyS蛋白浓度和PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平有异常改变,说明BLyS及其受体可能参与MM的发病;BLyS及其受体表达水平也许可作为预后的一个指标。
- 鞠少卿王跃国王金湖李小华王旭东徐建辉姚敏练小琪孔宪涛仲人前
- 关键词：B淋巴细胞刺激因子多发性骨髓瘤乳酸脱氢酶轻链免疫球蛋白
- Siglec-1在巨噬细胞吞噬脂质及分泌趋化因子中的作用被引量：2
- 2010年
- 目的 研究ox-LDL刺激对体外培养小鼠巨噬细胞株RA-W264.7和原代小鼠骨髓巨噬细胞Siglec-1表达的影响,及M-CSF促进巨噬细胞Siglec-1高表达或小干扰RNA（si-RNP,）靶向抑制Siglec-1表达特点,并观察巨噬细胞吞噬脂质和分泌趋化因子的变化,以探讨Siglec-1在巨噬细胞参与AS中的作用.方法 用铜氧化法制备ox-LDL,根据预实验结果,选取ox-LDL 100μg/ml作为刺激物,在含巨噬细胞溶液中加入不同类型si-RNA或不同浓度M-CSF后,分为6组[正常对照组（仅加巨噬细胞）、ox-LDL 100μg/ml组、ox-LDL 100 μg/ml＋Si-RNA 25092 ng/ml组、ox-LDL 100μg/ml＋si-RNA 36182 ng/ml组、ox-LDL 100 μg/ml＋M-CSF 5 ng/ml组和ox-LDL 100μg/ml＋M-CSF 10 ng/ml 组].分别用si-RNA转染巨噬细胞抑制Siglec-1表达,M-CSF刺激促进巨噬细胞Siglec-1表达,并用荧光定量PCR检测Siglec-1抑制或表达增强效果.再用ox-LDL刺激48 h收集细胞和培养上清液,ELISA测定培养上清液中MIP-1 alpha、MCP-1和IL-8的浓度（每组3复孔）,以观察巨噬细胞活化情况;油红0染色观察Siglec-1抑制或表达增强后对巨噬细胞吞噬脂质颗粒的影响（每组3复孔）.结果 巨噬细胞经si-RNA转染后,用荧光显微镜观察,si-RNA能有效转染巨噬细胞,转染效率约90%;荧光定量PCR检测si-RNA的结果显示,当si-RNA 2509和si-RNA,3618在最佳转染浓度（40 pmol/L）时,对Siglec-1抑制率分别为0.54±0.11和0.52±0.16;比正常对照组（1.00±0.24）高（t值分别为5.227、4.992,P均〈0.01）.M-CSF 10.g/ml刺激48 h后Siglec-1 mRNA表达增加约4倍（4.16±1.25比1.00±0.24,t=7.448,P〈0.01）.si-RNA 3618干扰Siglec-1后,MCP-1、MIP-1alpha和NIP-23个巨噬细胞趋化因子的分泌分别为（359.28±47.80）pg/ml、（33.76±14.28）ng/ml、（7.87±1.55）ng/ml,比单纯加ox-LDL 100μg/ml组明显降低[分别为（577.89±35.95）pg/ml、（69.17±11.82）ng/ml、（12.28±1.19）ng/ml,P分别〈0.001、0.05、0.01];而加M-CSF 10 ng/ml组可明显促进巨�
- 熊怡淞李畅孙懿仲人前
- 关键词：氧化型低密度脂蛋白巨噬细胞趋化因子
- 自身免疫性疾病噬菌体抗体库的构建和初步鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的构建系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（RA）、强直性脊柱炎、干燥综合症（SS）、原发性胆汁性肝硬化（PBC）等自身免疫性疾病的噬菌体抗体库。方法从多例确诊的高滴度自身免疫病患者外周血淋巴细胞中抽提总RNA，用RT—PCR方法分别扩增免疫球蛋白分子轻链κ、λ基因及重链Fd基因。经SacI和XbaI限制性双酶切后，在T4连接酶的作用下，将轻链基因片段克隆入同样双酶切的pComb3Hss载体中以构建轻链文库，随后将重链Fd段PCR产物经XhoI和SpeI双酶切后载入同样处理的κ/λpComb3Hss载体，然后将重组质粒κ/λ—Fd-pComb3Hss转化大肠杆菌XL1-Blue。用辅助噬菌体M13K07感染XL1-Blue，则可在噬菌体表面表达出随机的重组抗体库。结果提取的淋巴细胞总RNA及合成的cDNA质量好，PCR扩增了长度为660bp的轻链κ、λ基因及重链Fd基因，成功构建了库容为4×10^4的轻链抗体库和库容为6×10^4的Fab片段噬菌体抗体库，酶切及PCR鉴定均正确无误。结论成功构建了自身免疫性疾病的噬菌体抗体库，为进-步筛选出高亲和力抗体打下了基础。
- 吴炜霖夏维陆慧琦熊怡淞杨再兴周琳韩焕兴仲人前
- 关键词：自身免疫疾病细菌噬菌体抗体
- RNA干扰SOCS1对线粒体M2蛋白作用树突状细胞功能的影响
- 2012年
- 目的探讨细胞因子信号转导抑制分子1(SOCS1)干扰后,线粒体M2蛋白对外周血单个核细胞(PB-MC)来源的树突状细胞(DC)功能的影响。方法诱导和培养健康人PBMC来源DC,小干扰RNA(siRNA)抑制SOCS1的表达,用不同浓度的M2蛋白刺激DC,用流式细胞术(FCM)分析DC表型CD83、CD86的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测DC培养上清液中白细胞介素10(IL-10)和白细胞介素12(IL-12)的变化。结果DC在M2蛋白浓度为70μg/mL刺激24 h,35μg/mL刺激24、48和72 h时,与对照组比较,CD83和CD86的表达率以及IL-10和IL-12的水平均明显升高(P<0.05)。M2蛋白刺激SOCS1干扰后的DC,在不同刺激浓度和作用时间,CD83和CD86表达率以及IL-12水平与单纯M2蛋白刺激组相比均明显升高(P<0.05),而IL-10水平在两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DC在接受高浓度的M2蛋白刺激后,其成熟度、抗原递呈和Th1的极化能力增强;抑制SOCS1的表达,M2蛋白可进一步促进DC功能的增强,可能导致自身耐受的破坏。
- 周运恒马红霞曹广亚杨再兴仲人前
- 关键词：树突状细胞小干扰RNA
- miRNA与固有免疫被引量：1
- 2008年
- miRNA是近年来发现的一种小分子RNA,参与细胞分化、生长发育等多种生物学过程,与人类疾病密切相关。最近,有研究发现miRNA可以通过TLR的信号转导途径和细胞因子反应参与固有免疫。本文对miRNA和RNA干扰在固有免疫反应中的调控作用作一综述。
- 钱琤邓安梅仲人前
- 关键词：固有免疫MIRNASIRNA
