国家自然科学基金(30271191)
- 作品数：12 被引量：25H指数：3
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- 人乳头瘤病毒结构蛋白L1与白色念珠菌甘露糖蛋白CTL表位嵌合基因在昆虫细胞中的表达
- 2007年
- 目的构建携带人乳头瘤病毒(HPV)结构蛋白L1和白色念珠菌甘露糖蛋白(CaMp65)细胞毒性T细胞表位(CTL)基因的重组质粒,并在杆状病毒-昆虫细胞系统中进行表达。方法分别设计包含HPV6bL1和CaMp65CTL145-153的引物,经PCR扩增嵌合基因HPV6bL1/CaMp65CTL145-153,并进一步将其插入杆状病毒表达载体pFastBacTM1。在E.coliDH10Bac中组装成重组杆状病毒,在昆虫细胞sf-9中表达嵌合蛋白,并经SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定。结果HPV6bL1/CaMp65CTL145-153嵌合蛋白在昆虫细胞sf-9中得到了表达,表达产物的相对分子质量为56000,与HPV6bL1单抗能产生特异性反应。结论HPV6bL1/CaMp65CTL145-153嵌合蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中得到了成功表达,为防治HPV和白色念珠菌感染的基因工程疫苗的研究奠定了基础。
- 朱珊丽侯晓红欧琴陈韶董海艳林巧爱张丽芳
- 关键词：人乳头瘤病毒白色念珠菌嵌合基因昆虫细胞
- 人乳头瘤病毒结构蛋白及其疫苗的研究进展被引量：1
- 2004年
- 黄秋穗张丽芳吕杰强
- 关键词：人乳头瘤病毒疫苗基因结构
- 沙眼衣原体主要外膜蛋白T、B细胞多表位基因的表达及其鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的 对沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位进行预测和选择，并进行Ct MOMP多表位基因克隆和多表位蛋白的原核表达及其抗原性分析，为研制多表位Ct疫苗提供基础资料。方法利用SYFPEITHI法和多项式方案结合预测HLA-A2限制性的0MOMP的CTL表位，选取含多个CTL表位的基因片段作为目的基因，兼顾目的基因上下游存在的TH和B细胞表位的基因，共同组成含CTL、TH和B细胞表位的多表位基因。多表位基因经密码子优化后进行全序列合成，克隆入原核表达载体pET-32a（＋），经IPTG诱导在大肠杆菌BL21（DE3）表达并纯化，经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物。结果 经预测筛选得到了多个MOMPHLA-A2限制性的CTL表位，成功克隆了含CTL、TH、B表位的MOMP多表位基因，并在大肠杆菌中获得了高效表达。表达产物的相对分子质量（Mr）约24×10^3，与预期肘，相符，并用Western blot方法初步证实多表位蛋白有抗原特异性。结论 成功设计了Ct MOMP的T、B细胞多表位基因，并证实在原核表达系统中获得正确表达的多表位蛋白具有良好的抗原性。
- 朱珊丽郑丹欧琴陈俊陈韶张丽芳
- 关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白表位
- HPV6b结构蛋白L1和沙眼衣原体CTL表位嵌合病毒样颗粒在昆虫细胞中的表达
- 2008年
- 目的为研制能同时防治人乳头瘤病毒(HPV)和沙眼衣原体(Ct)的嵌合疫苗。方法将Ct主要外膜蛋白(MOMP)插入到HPV衣壳蛋白L1羧基端,通过PCR、酶切、连接等方法构建了杆状病毒表达载体,进一步在大肠杆菌中组装成重组杆状病毒,经感染昆虫细胞表达嵌合病毒样颗粒,并经SDS-PAGE电泳和Westernblot分析鉴定,电镜负染。结果嵌合蛋白HPV6bL1/CtMOMP249-268在昆虫细胞中得到了表达,表达产物的相对分子质量为56000,与HPV6bL1单抗产生特异性反应,电子显微镜观察到病毒样颗粒形成。结论在昆虫细胞中表达的含HPV6bL1和CtCTL表位的嵌合蛋白,能自行组装成病毒样颗粒,为人乳头瘤病毒和沙眼衣原体嵌合疫苗的研究奠定基础。
- 黄秋穗朱珊丽侯晓红王乐丹赖娟张丽芳
- 关键词：人乳头瘤病毒沙眼衣原体
- 尖锐湿疣合并淋球菌与解脲支原体感染对复发的影响被引量：9
- 2010年
- 目的探讨尖锐湿疣(CA)患者合并性传播疾病病原淋球菌(NG)、解脲支原体(UU)感染和复发情况,为临床治疗提供依据。方法对182例CA患者(试验组)和100例无CA的体检者(对照组)进行NG、UU检测,并对尖锐湿疣患者随访半年,统计其单纯感染及合并感染的复发率。结果182例CA患者中,有74例检出NG和(或)UU,检出率为40.7%。100例对照者中,有11例检出NG和(或)UU,检出率为11.0%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。CA组NG和UU的检出率分别为9.9%和33.5%,与对照组NG和UU的检出率分别为1.0%和10%间差异有统计学意义(P均<0.01)。18例CA合并NG感染者中,有7例复发(38.9%);61例CA合并UU感染者中,有23例复发(37.7%);84例单纯CA患者有12例复发(14.3%),复发率各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论尖锐湿疣患者常合并NG、UU感染,且尖锐湿疣患者中合并NG、UU感染者较单纯尖锐湿疣的复发率升高。因此在尖锐湿疣患者的临床诊治过程中,有必要同时进行NG、UU检测和相应治疗。
- 黄秋穗陈文兵王繁胡越张丽芳
- 关键词：尖锐湿疣淋球菌解脲支原体
- 病毒样颗粒疫苗的应用前景被引量：2
- 2004年
- 病毒样颗粒为一不含病毒核酸的空壳结构 ,与天然的病毒颗粒结构相似 ,具有很强的免疫原性和生物学活性 ,它在病毒感染的防治和血清学诊断方面具有广阔的应用前景。
- 朱珊丽张丽芳
- 关键词：VLPCTL疫苗
- 沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位基因的免疫原性研究
- 2009年
- 目的构建包含沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，Ct）主要外膜蛋白（major outer membrane protein，MOMP）多表位基因的真核表达质粒pcDNA3．1-CtMOMP168，检测其诱导BALB／c小鼠产生CtMOMP特异性体液和细胞免疫反应的水平。方法构建包含CtMOMP多表位基因的重组质粒pcDNA3．1，CtMOMP168并以肌肉注射方式免疫BALB／c小鼠，同时设置pcDNA3．1组和PBS组对照（每组12只，每只100μg/次）。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、乳酸脱氢酶释放法及细胞内细胞因子染色-流式细胞术（ICS—FACS）分别检测免疫小鼠血清中CtMOMP特异性抗体的滴度及其抗体亚型、脾脏中细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的杀伤活性及特异性分泌细胞因子，如γ-干扰素-（IFN-1）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）等的CD3^＋T细胞的水平。结果同pcDNA3．1（A490=0．180±0．025）和PBS免疫（A490=0．110±0．015）相比，pcDNA3．1-CtMOMP168免疫可刺激小鼠产生高效价0特异性IgG抗体（A490=0．973±0．136；血清滴度1：1000），且抗体亚型以IgG2a为主，差异有统计学意义（F=106．884，P〈0．05）；pcDNA3．1-CtMOMP168免疫组小鼠脾细胞中CTL杀伤活性（41．71％±8．34％）高于pcDNA3．1组（18．40％±3．45％）和PBS组（14．50％±2．42％），差异有统计学意义（F=22．315，P〈0．05；效靶比为50：1）；pcDNA3．1-CtMOMPl68免疫组小鼠的脾细胞中CtMOMP特异性CD3^＋IFN-γ^＋T细胞的水平（1．15％±0．16％）高于pcDNA3．1组（0．12％±0．08％）和PBS组（0．09％±0．03％），差异有统计学意义（F=99．638，P〈0．05），而pcDNA3．1-CtMOMP168组IL4^＋CD3^＋T细胞（0．13％±0．08％）和IL-10^＋CD3^＋T细胞（0．14％±0．08％）的水平与pcDNA3．1（0．07％±0．05％，0．13％±0．06％）和PBS（0．08％±0．04％，0．07％±0．04％）组比较差异无统计学意义（F值分别为0．886、1．112，P�
- 朱珊丽石朝辉李文姝陈俊张丽芳
- 关键词：细菌外膜蛋白质类表位
- 人乳头瘤病毒11型E7蛋白在原核细胞的表达及其诊断尖锐湿疣的价值被引量：2
- 2007年
- 目的研究人乳头瘤病毒(HPV)11型 E7蛋白在原核细胞的表达及其在尖锐湿疣(CA)血清学诊断中的应用价值。方法用 PCR 从 CA 患者组织中扩增 HPV11 E7全长基因,构建重组质粒 pET32a(+)/HPV11 E7,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后表达,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质印迹法(WB)分析鉴定;经镍螯合亲和层析胶体(Ni-NTA Agarose)纯化 HPV11 E7融合蛋白后作抗原,用间接 ELISA 法对93例 CA 患者、43例宫颈癌患者和58名健康对照者血清标本进行 IgG 抗体检测。结果 HPV11 E7融合蛋白在原核表达系统中呈较高效表达(浓度为40μg/ml)。CA 组、宫颈癌组和健康对照组血清 IgG 抗体均值分别为1.545±0.131、0.586±0.155和0.674±0.150,阳性率分别为76.3%(71/93)、11.6%(5/43)和5.2%(3/58);CA 组血清 IgG抗体均值及阳性率均高于宫颈癌组和对照组(均 P<0.01)。结论 HPV11 E7融合蛋白具较强的抗原性,用于 CA 血清学诊断试剂的研制具有临床应用价值。
- 郑丹张德意石朝辉涂权梅欧琴李琼英张丽芳
- 关键词：尖锐湿疣乳头瘤病毒蛋白
- 沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原表位的研究进展被引量：1
- 2005年
- 沙眼衣原体是人类生殖道感染的常见病原菌,其主要外膜蛋白具有较强的抗原性,是目前沙眼衣原体疫苗靶抗原的最佳选择。本文就沙眼衣原体主要外膜蛋白的CTL表位、Th细胞表位和B细胞表位的研究进展作一简要综述。
- 王乐丹张丽芳
- 关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原表位
- 人乳头瘤病毒6b L1 VLPs免疫治疗生殖道尖锐湿疣的初步研究被引量：1
- 2007年
- 目的:研究人乳头瘤病毒(HPV)6b型L1蛋白形成的病毒样颗粒(VLPs)对女性生殖道复发性尖锐湿疣(CA)的免疫治疗作用。方法:采用HPV6bL1VLPs1μg、5μg、10μg3组剂量经0w、4w、8w免疫18例CA复发患者。分别用ELISA法和迟发性超敏反应(DTH)检测血清特异性抗体和细胞免疫效应,同时每周随访观察CA病变情况直到20w。结果:所有研究对象均能在免疫后的血清中检测到特异性抗体。各剂量组免疫前后比较,血清抗体均值间差异均有统计学意义(均P<0.05);所有患者DTH试验均呈阳性反应。经免疫治疗后20w的观察,77.8%(14/18)的患者CA完全消退,61.1%(11/18)的患者CA于9w之内完全消退,14例CA完全消退对象随访1年未见复发。生殖道CA消退与机体DTH反应有相关性(rs=-0.746,P=0.000)。结论:HPV6bL1VLPs可用于生殖道复发性CA的免疫治疗研究。
- 张丽芳周健陈韶蔡莲莲
- 关键词：人乳头瘤病毒病毒样颗粒尖锐湿疣
