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金黄色葡萄球菌ClfA基因表达产物在小鼠的免疫原性分析被引量：2: 2010年; 为分析原核表达的金黄色葡萄球菌ClfA部分基因表达产物的免疫原性,作者采用PCR方法从奶牛乳房炎病例中分离的金黄色葡萄球菌中克隆出ClfA基因的部分片段,测序后用DNAman软件进行抗原位点分析。构建原核表达质粒ClfA-pET-28a+,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达。用His-bind柱纯化表达蛋白,加弗氏佐剂混匀后免疫小鼠。小鼠分娩后乳腺内攻菌,检查乳腺组织病理变化,乳腺组织中金葡菌数量和TNF-α水平来评价原核表达蛋白的免疫保护效果。结果显示转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导可以表达ClfA蛋白。原核表达蛋白抗原免疫小鼠可以显著降低乳腺组织内金葡菌数量,TNF-α水平也显著低于对照组和全菌蛋白抗原组,提示原核表达的ClfA蛋白免疫小鼠可以减少乳腺内金葡菌定植的数量,减轻乳腺内感染造成炎症的严重程度。本研究表明原核表达金黄色葡萄球菌ClfA蛋白有一定的免疫保护效果,为奶牛乳房炎疫苗的研究提供科学依据。; 杨明锋陈创夫曹旭东刘君王正荣李贞乔军; 关键词：乳房炎金黄色葡萄球菌小鼠免疫原性

新疆北部地区奶牛子宫内膜炎主要病原菌的分离鉴定及其血细胞成分分析被引量：11: 2010年; 对临床确诊为奶牛子宫内膜炎的75头荷斯坦奶牛进行子宫炎性分泌物采样,用常规方法进行细菌分离培养及鉴定,并对19头患子宫内膜炎奶牛和8头健康奶牛进行血细胞成分分析。结果共分离鉴定出细菌189株,其中金黄色葡萄球菌56株(29.62%),大肠埃希氏菌52株(27.51%),铜绿假单胞菌25株(13.23%),蜡样芽孢杆菌22株(11.64%),无乳链球菌17株(8.99%),停乳链球菌10株(5.30%),沙门氏菌3株(1.59%),中间葡萄球菌2株(1.06%),表皮葡萄球菌、普通变形杆菌各1株(0.53%)。血细胞成分分析结果表明,子宫内膜炎奶牛组与健康奶牛组相比,淋巴细胞(LYM)、粒细胞(GRAN)、平均血红蛋白含量(MCH)、血小板分布宽度(PDW)、血小板压积(PCT)等差异极显著(P<0.01),其余指标差异不显著(P>0.05)。; 张银亮陈创夫乔军刘贤侠王利晓余胜利胡朝辉; 关键词：奶牛子宫内膜炎病原菌血细胞分析

荷斯坦奶牛IFN-γ基因的克隆、序列分析及表达研究: 2010年; 利用RT-PCR技术从荷斯坦奶牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增IFN-γ(ccIFN-γ)基因,克隆至pMD18-T载体进行测序。测序结果表明,ccIFN-γ基因全长501bp,编码166个氨基酸,其中前23个氨基酸残基构成信号肽序列,后面147氨基酸残基构成成熟肽,其中含有2个潜在的N-链糖基化位点。二级和三级结构预测发现,ccIFN-γ蛋白分子中存在7个的α-螺旋,中间由无规卷曲连接,折叠成由α-螺旋包绕的中空状结构。将ccIFN-γ成熟肽编码区序列进一步克隆至pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。经SDS-PAGE分析,表达出与预期大小(20.6KDa)相符的重组蛋白,占菌体蛋白18.6%。Western blot检测证实表达的融合蛋白为牛IFN-γ,这为进一步开展重组ccIFN-γ生物学活性的研究奠定了基础。; 李贞陈创夫乔军任艳张辉杨明峰刘佳旭倪伟; 关键词：荷斯坦奶牛 Γ-干扰素基因原核表达

奶牛乳房炎防治的新进展被引量：12: 2011年; 奶牛乳房炎是高产奶牛最常见的疾病,对奶业的发展危害严重。近年来,国内外学者对该病开展了大量的研究工作,作者对奶牛乳房炎的研究进展作一综述,为该病的科学防治提供有益的参考。; 李国华李贞乔军陈创夫; 关键词：奶牛乳房炎

SELEX技术及其应用前景被引量：4: 2008年; SELEX技术又称指数级富集的配体系统进化技术,其原理是从随机寡核苷酸文库中筛选到能特异性结合靶物质的寡核苷酸配体(称为适配子)。由于适配子与靶物质结合的特异性和亲和力可与抗体媲美,SELEX技术已经被广泛应用于生命科学各个领域的研究工作中,显示出良好的应用前景。; 孟庆玲陈创夫; 关键词：SELEX技术

赤羽病研究进展被引量：11: 2008年; 赤羽病是引起牛、羊繁殖障碍的一种重要病毒性疫病,是我国从国外进口牛、羊必须检测的七种疫病之一,对我国养牛业和养羊业危害严重。近年来,人们对该病病原学、流行病学、诊断和免疫预防进行了大量的研究,为该病的科学防控提供了依据。; 乔军陈创夫任艳; 关键词：赤羽病

金黄色葡萄球菌FnBP重组牛痘病毒的构建与鉴定研究: 利用PCR技术从致奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌SHZ1株基因组中扩增出FnBP基因,构建重组转移质粒pSC11-FnBP,利用脂质体转染法将重组转移质粒转染已感染牛痘弱毒株病毒的BHK-21细胞中,蓝白斑筛选重组牛痘病毒。...; 李贞陈创夫乔军胡圣伟; 关键词：金黄色葡萄球菌; 文献传递

链球菌GapC基因重组痘苗病毒的构建及筛选与鉴定: 2012年; 为了研制链球菌性奶牛乳房炎的有效疫苗,首先用PCR方法扩增出停乳链球菌的GapC基因。其次将GapC基因连接到pSC11穿梭质粒上,构建pSC11-GapC重组穿梭质粒。然后在脂质体的介导下将pSC11-GapC转染已感染痘苗病毒的BHK-21细胞,使之与痘苗病毒基因在BHK-21细胞内进行同源重组,得到GapC重组痘苗病毒,用rVV-GapC表示。最后用蓝斑法连续筛选5次rVV-GapC重组毒,再用PCR和Western blot分别检测rVV-GapC的重组和表达情况。结果显示,PCR电泳检测到目的条带,测序结果与GenBank公布的标准序列同源性99%,Western blot试验证明GapC蛋白在重组毒中进行了表达。rVV-GapC构建成功。重组痘苗病毒的构建为链球菌性奶牛乳房炎疫苗的研究奠定基础。; 李国华李贞乔军陈创夫才学鹏孟庆玲丁波; 关键词：痘苗病毒

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兵团博士基金(2008JC08)