国家自然科学基金(31140026)
- 作品数：8 被引量：38H指数：4
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- 氨基糖苷类抗生素耐药机制研究进展被引量：7
- 2015年
- 分别从氨基糖苷类抗生素修饰酶、核糖体靶位修饰、药物的主动外排系统3个方面对近年来氨基糖苷类抗生素耐药机制的最新研究进展做以综述,以期为临床合理应用氨基糖苷类抗生素及控制致病菌氨基糖苷类耐药性提供参考。
- 王梓孔令聪贾博岩刘树明马红霞
- 关键词：氨基糖苷类抗生素耐药性耐药机制
- 家蝇幼虫防御素基因Mdd Ⅰ在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性鉴定
- 2015年
- 根据家蝇幼虫防御素基因(MddⅠ)序列,设计合成含有KpnⅠ和XbaⅠ酶切位点的特异性引物,PCR扩增出MddⅠ基因全长序列。克隆并测定序列后,构建真核表达质粒pGAPZαAMddⅠ,将其在毕赤酵母(P.pastoris)GS115中分泌表达,并对表达产物进行抑菌活性分析。结果表明,Mdd 1基因在P.pastoris如中成功表达,分子量约为10.3 kDa,抑菌结果显示MddⅠ基因的真核表达产物对猪源链球菌有抑制作用。该试验成功构建了表达MddⅠ基因的P.pastoris菌株,为进一步研究MddⅠ真核表达产物的生物学活性和免疫学活性奠定了基础。
- 傅小蒙万玲唐艳孔令聪裴志花刘树明马红霞
- 关键词：家蝇防御素P.PASTORIS
- 家蝇幼虫防御素基因MddⅠ的克隆与原核表达被引量：3
- 2013年
- 以猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫的cDNA为模板,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)对MddⅠ基因进行扩增,对扩增产物测序和分析。构建重组表达质粒pET-32a-MddⅠ,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG对其诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析。结果,MddⅠ基因全长475bp,其开放阅读框(ORF)276bp,编码91个氨基酸,编码蛋白的理论分子质量9.7ku,理论等电点(pI值)8.89,存在信号肽的剪切位点,亲水性较强且无明显跨膜区,α螺旋和不规则盘绕为其主要结构元件,β折叠散布在整个蛋白质中。具有Defensin-2家族保守区域,与GenBank中登录号为AY260152同源性最高,达78%。构建的重组表达质粒pET-32a-MddⅠ在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出分子质量约为25ku的蛋白质,与预期大小一致。结果表明,MddⅠ基因具有完整的开放阅读框,为新的家蝇防御素基因;MddⅠ基因在原核表达系统中的表达为进一步研究表达产物的生物学活性和免疫学活性奠定了基础。
- 万玲傅小蒙唐艳孙小宁裴志花刘树明马红霞
- 关键词：家蝇防御素原核表达
- 7株牛源A型巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析被引量：7
- 2015年
- 对2014年沈阳地区患有呼吸系统疾病的育肥牛场进行病原分离,得到7株分离菌,对其进行培养形态及染色观察、病理组织切片观察、动物致病性观察及16S序列分析,初步鉴定为牛多杀性巴氏杆菌(Pm)。利用Pm种特异性引物及荚膜血清特异性引物进行PCR扩增,均得到目的基因条带。对分离菌进行药敏试验的结果显示,5株分离菌株已对阿米卡星、新诺明产生较强耐药性;7株分离菌均对氟苯尼考、恩诺沙星、四环素及氨苄西林敏感。由此确定,分离菌株均为牛荚膜A型巴氏杆菌,且已具有一定耐药性。
- 王梓孔令聪贾博岩刘树明马红霞
- 关键词：耐药性
- 抗菌肽在多领域应用的研究进展被引量：3
- 2014年
- 抗菌肽（antibacterial peptides）是生物体内免疫系统产生的一类抵抗外界病原体感染的多肽,是先天免疫的重要组成成分。抗菌肽能非特异性的抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗寄生虫等病原体,并对肿瘤细胞、多重耐药菌也具有明显的杀伤作用,但不损伤体细胞,无毒副作用。近年来,人们从植物、昆虫、两栖类、水产类以及哺乳类动物甚至一些细菌中都发现了抗菌肽。
- 裴志花孙小宁王开陈绍辉马红霞
- 关键词：抗菌肽基因ANTIBACTERIAL水产类抗寄生虫病原体感染先天免疫
- 毕赤酵母表达系统优化策略概述被引量：8
- 2015年
- 毕赤酵母(Pichia pastor)表达系统是近年发展起来的一种高效表达外源蛋白的系统,利用该系统表达外源基因具有良好的应用前景。尽管毕赤酵母表达系统具有比较完备的基因表达调控机制和对真核基因表达产物的加工修饰能力,但由于基因本身及表达系统等诸多因素,仍然存在外源蛋白表达产量很低甚至不表达的情况。针对毕赤酵母表达系统这一因素,对表达载体的优化,毕赤酵母菌株优化及发酵条件优化进行了综述,以期为外源基因在毕赤酵母中的高效表达提供理论基础。
- 傅小蒙孔令聪裴志花刘树明马红霞
- 关键词：毕赤酵母菌株发酵
- 牛支原体耐药性研究进展被引量：7
- 2013年
- 在对国内外牛支原体的耐药性研究进展做以综述的基础上,对近年来支原体的耐药机制进行了概述,以期为养牛业生产中牛支原体病的防治和耐药机制的研究提供参考。
- 孔令聪张春艳高云航马红霞
- 关键词：牛支原体耐药性
- 家蝇溶菌酶1基因的克隆、序列分析及原核表达被引量：3
- 2014年
- 采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),对鸡致病性大肠杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减文库(SSH)中筛选得到家蝇溶菌酶1基因((Musca domestica lysozyme-1,MdL-1)进行扩增,测序分析得到一个全长为537 bp的cDNA片段,其开放阅读框(ORF)432 bp,与Genbank中登录号为AY344589.1基因同源性为96%。构建重组表达质粒pET-32a-MdL-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示,表达产物大小约为34 kD,与预期蛋白大小一致。结果表明,利用RACE技术克隆得到MdL-1全长基因并在大肠杆菌中获得了表达,为进一步研究该蛋白的生物学及免疫学活性奠定了基础。
- 王梅梅万玲孔令聪裴志花刘树明马红霞
- 关键词：家蝇克隆原核表达
