浙江省科技厅科技计划项目(2006C34005)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：黄慧聪赵巧莲潘长旺南存标梁韶晖更多>>
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- 隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素P30基因的克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2009年
- 目的克隆隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素P30基因并测序,对其进行生物信息学分析。方法采用聚合酶链(PCR)技术,从微小隐孢子虫基因组中扩增P30基因,然后将其克隆入pMD18-T载体,转化后挑取阳性克隆进行酶切和测序鉴定,并对获得的P30基因进行生物信息学分析。结果PCR扩增得到特异的微小隐孢子虫P30基因,测得的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与GenBank上提交的序列同源性分别为98%～100%和99%～100%。结论成功克隆出序列正确的微小隐孢子虫P30基因,预测的P30蛋白具有9个潜在的抗原表位,为其相关研究奠定了基础。
- 赵巧莲黄慧聪潘长旺梁韶晖南存标
- 关键词：隐孢子虫P30基因生物信息学分析
- 隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素p30原核表达系统的构建及鉴定
- 2010年
- 目的获取隐孢子虫Gal/Gal NAc特异性凝集素p30基因,并构建原核表达系统,获得相应的重组蛋白。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术,从微小隐孢子虫基因组中扩增出p30基因,然后将其克隆入pMD18-T载体,转化后挑取阳性克隆进行酶切和测序鉴定,并进行生物信息学分析及预测。再将亚克隆与表达载体PET-28a(+)分别酶切并连接,经IPTG诱导表达,表达产物用Ni-NTA亲和层析法纯化,SDS-PAGE和Western blotting检测表达效果。结果PCR扩增得到特异的微小隐孢子虫Gal/Gal NAc特异性凝集素p30基因,测得的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与GenBank上提交的序列同源性分别为98%～100%和99%～100%,理论等电点和分子量分别为6.4854和31842Da,并存在9个潜在的抗原表位。经酶切、测序结果表明质粒已导入Rosetta。SDS-PAGE和Western blotting证实重组菌成功表达融合蛋白。结论成功构建微小隐孢子虫Gal/Gal NAc特异性凝集素p30原核表达系统。
- 黄慧聪赵巧莲谭峰潘长旺
- 关键词：隐孢子虫P30基因原核表达
