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副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立被引量：4: 2016年; 为建立检测副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的快速检测方法,本研究以VPtoxR基因为靶基因设计合成引物及TaqMan探针,建立了实时荧光定量PCR快速检测VP的方法。结果显示,对15株试验菌株进行实时荧光定量PCR检测,只有VP检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为4.9CFU/mL,利用该检测方法对采集的150份样品进行检测,共计检出3份VP阳性样品,与国标法(GB 4789.7—2013)检测结果一致,显示了良好的实用性。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。; 李丹丹徐义刚王昱邱索平高会江高慎阳; 关键词：副溶血弧菌实时荧光定量PCR

肠出血性大肠埃希菌O157∶H7实时荧光定量PCR快速检测方法的建立被引量：5: 2014年; 本试验针对肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7高度保守的rfbE基因序列设计合成引物及TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了检测EHEC O157∶H7实时荧光定量PCR方法。结果显示,该法灵敏度约为7.3CFU/mL,对310份肉类、蛋、奶及其制品和动物腹泻物、人工污染样品等进行检测,共检出阳性样本20份,与采用AOAC标准检测结果的符合率为100%。表明建立的实时荧光定量PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。; 李丹丹徐义刚王绥家高慎阳李一经; 关键词：H7 荧光定量PCR

猴D型反转录病毒Ⅰ型抗体免疫梳检测方法的建立及应用: 2018年; 为建立猴D型反转录病毒Ⅰ型抗体（SRVl）的快速检测方法，本试验采用基因工程技术制备SRV1的SRV1—30基因原核表达产物重组SRV1—30蛋白作为抗原诊断试剂，建立免疫梳方法用于特异性检测实验猴血清中抗SRV1的抗体IgG。结果显示，最佳抗原包被量为100mg／L；制备好的免疫梳均能够特异性检测到相应的猴SRV1病毒阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应，表明该检测方法特异性强；敏感性分析结果表明，SRV130蛋白能够敏感地检测到1：200倍稀释的SRVl阳性血清；稳定性和重复性试验结果表明，同一样品重复检测3次，变异系数（CV）均小于10％；利用该检测方法在对12份可疑猴血清样品进行检测，免疫梳方法与ELISA检测结果一致率为100．0％，Kappa-1.000。该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好，具有良好的实用性。; 李丹丹安微陈平亚张体银杨俊兴邱索平徐义刚高慎阳; 关键词：抗体

动物源性食品中志贺氏菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立被引量：6: 2014年; 根据志贺氏菌属高度保守的ipaH基因序列,设计探针和引物,通过优化反应条件,建立检测动物源性食品中志贺氏菌实时荧光定量PCR方法,应用于动物源性食品中志贺氏菌的快速检验。结果表明,该法灵敏度约为2.8 cfu·mL-1,经对205份肉类、蛋、奶及其制品和动物腹泻物、人工污染样品等进行检测,共检出13份阳性样本,与国标(GB 4789.5-2012)方法的检测结果一致。表明建立的荧光PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好实用性。; 李丹丹徐义刚王绥家高慎阳李一经; 关键词：志贺氏菌 IPAH基因荧光定量PCR

猴STLV1抗体免疫梳检测方法的建立及应用被引量：1: 2020年; 以基因工程技术制备猴嗜T淋巴细胞病毒I型(STLV1)的STLV1-30蛋白作为诊断抗原,建立用于特异性检测实验猴血清中抗STLV1抗体的免疫梳方法。应用原核表达载体pGEX-4T-1构建STLV1 STLV1-30基因的重组表达质粒,并在感受态细胞BL21中表达,将该重组蛋白纯化后作为诊断抗原,建立免疫梳标准化检测程序,并应用于临床检测。结果显示,最佳抗原包被量为0.02 mg/mL;制备好的免疫梳均能够特异性检测到相应的STLV1阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应;该方法能够敏感地检测到1∶400倍稀释的STLV1阳性血清;稳定性和重复性试验结果显示,同一样品重复检测3次,变异系数(CV)均小于10%;利用该检测方法在对11份可疑猴血清样品进行检测,免疫梳方法与ELISA检测结果一致率为100.0%,Kappa=1.000。表明该检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特性,可用于猴T淋巴细胞趋向性病毒I型抗体的检测。; 李丹丹王乃福王绥家刘忠梅王昱周晓黎艾军高慎阳凌宗帅李应国; 关键词：抗体

LAMP方法快速检测实验猴粪便样品中志贺菌被引量：2: 2015年; 为了缩短检测周期,加快通关速度,根据基因库中志贺菌属特异性基因(ipa H)的保守序列,试验设计1套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,建立了实验猴粪便中志贺菌的LAMP检测方法。对志贺菌纯培养的敏感性可达7.5×100CFU/m L,对临床样品的敏感性可达到7.5×103CFU/m L;整个检测过程仅需12 h,且不需要昂贵的实验设备;该方法对12株其他菌株无扩增反应,且试验结果可通过肉眼观察颜色变化直接判定。试验表明,LAMP方法简便、灵敏、特异,适用于实验猴粪便样品中志贺菌的快速检测。与PCR相比,LAMP方法更加适合在基层推广使用。; 邱索平李丹丹马保华游勇来林志雄赵琼; 关键词：志贺菌环介导等温扩增实验猴

动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立被引量：8: 2014年; 根据沙门菌属高度保守的fimY基因序列设计探针和引物,通过优化反应条件,建立检测动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR方法,应用于动物性食品中沙门菌的快速检验。建立的荧光PCR方法灵敏度约为5.2cfu/mL,经对781份肉类、蛋、奶及水产品进行检测,共检出56份阳性样本,与国标(GB/T4789.4——2008)方法的检测结果一致。建立的荧光PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。; 李丹丹徐义刚王绥家高慎阳马广鹏; 关键词：沙门菌实时荧光定量PCR

基于vvhA基因检测创伤弧菌实时荧光PCR方法的建立被引量：3: 2016年; 为建立创伤弧菌(VV)的快速检测方法,根据vvhA基因序列设计合成引物和探针,建立实时荧光PCR方法。结果显示:所建立的方法能特异扩增出VV标准阳性菌株,而对其它14种菌株没有扩增;该方法的灵敏度为15CFU/mL;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测4次Ct值(循环阈值)的变异系数均小于2%;利用该检测方法对采集的156份样品进行检测,共计检出2份VV阳性样品,与行标法(SN/T 1870—2007)检测结果一致。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。; 李丹丹徐义刚邱索平王昱高会江高慎阳; 关键词：创伤弧菌实时荧光定量PCR

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国家质检总局科技计划项目(2013IK031)