国家高技术研究发展计划(2001AA217041)
- 作品数：1 被引量：5H指数：1
- 相关作者：吴祖泽朱宝珍毕建进田博吴彬更多>>
- 相关机构：山东师范大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 悬浮培养HEK-293 N3S细胞生产重组腺病毒Ad-GFP的实验研究被引量：5
- 2007年
- 利用5L生物反应器悬浮培养HEK-293N3S细胞生产携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒（recombinant adenovirus-greenfluorescent protein,Ad-GFP）,为规模化生产腺病毒基因药物建立一种稳定可行的生产工艺。复苏的种子细胞进行逐级放大最后接入5L搅拌式生物反应器中,采用含5%胎牛血清（FBS）的DMEM/F12培基灌流培养293N3S细胞,当细胞密度达到（2-4）×10^6个/mL时感染Ad-GFP,48h后收获细胞,经两步氯化铯超速离心获得纯化的Ad-GFP。采用紫外分光光度计比色法和高压液相色谱法（HPLC）测定病毒颗粒数和纯度,采用组织培养半数感染剂量（TCID50）法检测腺病毒的感染滴度。连续培养10-12d,细胞密度可达到（2-4）×106个/mL左右,纯化的Ad-GFP感染滴度和颗粒数分别为1.0×10^11IU/mL和1.68×10^12VP/mL,比活性为6.0%,A260/A280比值为1.33,产品纯度达到99.2%。建立了5L生物反应器悬浮培养293N3S细胞生产重组腺病毒Ad-GFP的生产工艺,对携带其他基因的重组腺病毒药物生产具有一定的指导意义。
- 田博吴彬张群伟毕建进王澜朱宝珍耿越吴祖泽
- 关键词：重组腺病毒生物反应器
