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人杀菌/通透性增强蛋白活性片段基因在CHO细胞中的表达: 2007年; 目的获得人杀菌/通透性增强蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)N端活性片段蛋白,为BPI结构和功能的研究提供有力的工具。方法提取人外周血多形核白细胞(PMN)总RNA进行逆转录反应,经套式PCR扩增出BPIN端基因片段,将其克隆入pUC19载体中并进行酶切鉴定和序列测定,然后亚克隆入质粒pcDNA3构建真核表达载体pcDNA-BPI;重组载体通过脂质体转染CHO细胞并筛选阳性克隆,免疫荧光法鉴定重组BPI的表达和免疫学活性。结果酶切鉴定和序列分析证实重组质粒含有包括信号肽在内的BPI活性片段编码序列,与文献报道的序列相比,有6个核苷酸差异。转染筛选的阳性CHO细胞克隆表达产物能够被抗BPI的单克隆抗体所识别。结论BPI活性片段表达载体的构建及真核表达成功,为BPI功能的研究奠定了基础。; 刘家云龙铟马越云丁振若于文彬苏明权郝晓柯; 关键词：逆转录PCR 真核表达

杀菌/通透性增强蛋白N端cDNA的克隆和表达被引量：5: 2000年; 目的　克隆杀菌 /通透性增强蛋白 (BPI) N端 c DNA,构建原核和真核表达载体 ,分别在大肠杆菌和 CHO细胞中表达 BPI蛋白 .方法　提取正常人外周血多形核粒细胞 (PMN)总 RNA,经套式 RT- PCR法扩增出 BPI N端 c DNA片段 ,将其克隆入 p GEM- T easy载体中并进行酶切鉴定和序列测定 .然后亚克隆入 p GEX- 4T- 1质粒 ,转化大肠杆菌 ,进行诱导表达 ,表达产物用 Western blot法鉴定 .同时将该基因片断克隆入 pc DNA3质粒 ,通过脂质体转染 CHO细胞 ,免疫荧光法鉴定 BPI的表达 .结果　获得 BPI N端长度为 72 6 bp的基因片断 .序列分析证实该片断中有 4个点突变 ,但均不在活性中心 .在大肠杆菌中的表达产物为相对分子质量 5 1× 10 3的GST- BPI融合蛋白 ,Western blot反应中在 5 1× 10 3处有显色区带 .G418筛选出的阳性 CHO细胞在免疫荧光反应中产生荧光反应 .结论　我们成功的在大肠杆菌和 CHO细胞中表达了 BPI2 5蛋白 ,为进一步研究; 马越云马文煜于文彬刘家云苏明权; 关键词：克隆基因表达 N端 CDNA

杀菌/通透性增加蛋白的细胞定位: 2000年; 目的　确定人体内能产生杀菌 /通透性增加蛋白(bactericidal/ permeability- increasing protein,BPI)的细胞群体 ,为研究 BPI在细胞内的定位奠定基础 .方法　分离人外周血获得嗜中性多形核粒细胞 (polymorphonuclear neutrophils,PMN )和单个核细胞 ,PMN,HL - 6 0及单个核细胞分别进行RNA提取 ,逆转录 PCR反应扩增 BPI基因片段和免疫荧光法检测 .结果　逆转录 PCR在 PMN和 HL- 6 0细胞中扩增出BPI基因片段 ,活细胞免疫荧光染色观察到 PMN和 HL- 6 0能够与抗 BPI的单抗所结合而呈阳性 .结论　; 刘家云于文彬马越云丁振若苏明权陈云春; 关键词：逆转录PCR 细胞定位

广谱抗LPSmAb的生物学活性被引量：5: 2000年; 目的　鉴定抗 L PS m Ab对不同种属细菌及其 L PS的交叉反应性和保护活性 .方法　以间接 EL ISA,Western印迹试验鉴定 m Ab对不同种属细菌及其 L PS的交叉反应性 ;检测不同浓度 m Ab对 L PS诱导的淋巴细胞分泌 TNF- α和IL- 6的抑制作用 ;以大肠埃希菌、铜绿色假单胞菌、鼠伤寒沙门菌建立小鼠菌血症模型 ,鉴定 m Ab的保护作用 .结果　在EL ISA试验中 ,抗 L PS m Ab C3A2和 H3D3可与鉴定所用的18株革兰阴性菌产生交叉反应 ;在 Western印迹试验中可与鉴定所用的全部 7个种属的 L PS产生交叉反应 ;随 m Ab浓度的提高 ,L PS诱导淋巴细胞分泌 TNF- α和 IL- 6的作用受到抑制 ;在动物保护试验中 ,相对于生理盐水对照组 ,存活率提高30 %～ 6 0 % .结论　抗 L PS m Ab C3A2和 H3D3不仅对众多革兰阴性菌 L PS具有广泛交叉反应性。; 马越云苏明权丁振若于文彬; 关键词：单克隆抗体脂多糖生物学活性

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国家自然科学基金(39800154)